[发明专利]一种用于检测Tau蛋白的单链抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测Tau蛋白的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体包括包含重链可变区V_H和轻链可变区V_L，以及用于连接所述重链可变区V_H和所述轻链可变区V_L的柔性连接肽；

所述重链可变区V_H的互补决定区具有CDR1_H、CDR2_H和CDR3_H的片段，所述CDR1_H、CDR2_H和CDR3_H的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.1～3所示；

所述轻链可变区V_L的互补决定区具有CDR1_L、CDR2_L和CDR3_L的片段，所述CDR1_L、CDR2_L和CDR3_L的氨基酸序列分别如SEQ IDNo.4～6所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测Tau蛋白的单链抗体，其特征在于，所述重链可变区V_H的氨基酸序列优选如SEQ ID No.7所示；所述轻链可变区V_L的氨基酸序列优选如SEQID No.8所示。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测Tau蛋白的单链抗体，其特征在于，所述柔性连接肽为氨基酸序列(G₄S)₃所示的肽链。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测Tau蛋白的单链抗体，其特征在于，所述单链抗体按照轻链可变区V_L-柔性连接肽-重链可变区V_H的顺序构成，氨基酸序列如SEQ ID No.9所示。

5.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子编码权利要求1～4中任一项所述的单链抗体。

6.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含权利要求1～4中任一项所述的单链抗体或权利要求5所述的DNA分子。

7.一种检测Tau蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1～4中任一项所述的单链抗体或权利要求5所述的DNA分子。

8.权利要求1所述的一种用于检测Tau蛋白的单链抗体的制备方法，其特征在于，包括：

1)cDNA模板的合成

取处于对数生长期的分泌抗Tau蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株提取总RNA，反转录PCR合成cDNA；

2)PCR扩增轻链可变区V_L基因和重链可变区V_H基因

以获得的cDNA为模板，设计所述重链可变区V_H和所述轻链可变区V_L的引物，进行PCR获得所述所述重链可变区V_H和所述轻链可变区V_L片段；

3)合成单链抗体

采用重叠延伸PCR通过柔性连接肽连接所述重链可变区V_H和所述轻链可变区V_L片段，合成得到所述单链抗体基因；

4)构建重组工程菌

将所述单链抗体核苷酸序列重组至原核表达载体中，构建获得表达所述单链抗体的重组表达质粒，将所述重组表达质粒导入基因工程菌中构建重组工程菌；

5)单链抗体的表达

将得到的重组工程菌进行诱导培养，获得所述单链抗体并纯化。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述轻链可变区V_L的引物为如SEQ IDNo.10～11所示的核苷酸序列，所述重链可变区V_H的引物为如SEQ ID No.12～13所示的核苷酸序列。

10.权利要求1～4中任一项所述的单链抗体或权利要求5所述的DNA分子或权利要求6所述的重组质粒在制备Tau蛋白检测产品中的应用。