[发明专利]一种单层上皮细胞模型快速分类筛选新药血脑屏障通透性的方法

权利要求书

1.一种单层上皮细胞模型快速分类筛选新药血脑屏障通透性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将LLC-PK1细胞和LLC-PK1-MDR1细胞分别接种于Transwell板的小室上室，培养得到跨膜电阻值为70Ω·cm²的LLC-PK1细胞单层膜和跨膜电阻值为66Ω·cm²的LLC-PK1-MDR1细胞单层膜；

将所述LLC-PK1细胞单层膜和所述LLC-PK1-MDR1细胞单层膜分别进行待测药物的双向转运实验，其中Transwell板的小室上室加入含有待测药物的缓冲液，Transwell板的小室下室加入空白缓冲液，记为A-B转运方向；Transwell板的小室下室加入含有待测药物的缓冲液，Transwell板的小室上室加入空白缓冲液，记为B-A转运方向；

测定所述LLC-PK1细胞单层膜和所述LLC-PK1-MDR1细胞单层膜A-B转运方向的表观渗透系数，分别记为P_app(A-B)WT和P_app(A-B)MDR1；

测定所述LLC-PK1细胞单层膜和所述LLC-PK1-MDR1细胞单层膜B-A转运方向的表观渗透系数，记为P_app(B-A)WT和P_app(B-A)MDR1；

根据式Ⅰ分别计算LLC-PK1细胞单层膜的外排率和LLC-PK1-MDR1细胞单层膜的外排率；其中LLC-PK1细胞单层膜的外排率记为ER_WT；LLC-PK1-MDR1细胞单层膜的外排率记为ER_MDR1；

ER＝P_app(A-B)/P_app(B-A)               式Ⅰ；

根据式Ⅱ计算得到CFR值；

CFR＝ER_MDR1/ER_WT                 式Ⅱ；

当ER_WT、ER_MDR1和CFR均2，P_app(A-B)WT≥10×10^-6cm/s时，待测药物是被动扩散高透膜性药物；

当ER_WT、ER_MDR1和CFR均2，P_app(A-B)WT10×10^-6cm/s时，待测药物是被动扩散低透膜性药物；

当ER_MDR1和/或CFR≥2，P_app(A-B)WT≥10×10^-6cm/s时，待测药物是主动外排中等透膜性药物；

当ER_MDR1和/或CFR≥2，P_app(A-B)WT10×10^-6cm/s时，待测药物是主动外排低透膜性药物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，接种用LLC-PK1细胞和LLC-PK1-MDR1细胞均为复苏后传代至少2次的细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LLC-PK1细胞的接种浓度为2×10⁵cell/mL；所述LLC-PK1-MDR1细胞的接种浓度为1×10⁵cell/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LLC-PK1细胞在Transwell板的小室上室的培养时间为4天；所述LLC-PK1-MDR1细胞在Transwell板的小室上室的培养时间为7天。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，培养LLC-PK1细胞和LLC-PK1-MDR1细胞的培养基均为1640完全培养基。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液包括HBSS缓冲液。