[发明专利]无弹状病毒的Sf9-PT细胞及其应用

说明书

本申请提供了一株无弹状病毒的Sf9‑PT细胞及其应用。该细胞已于2023年03月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C202334。本申请筛选的Sf9‑PT细胞株未被弹状病毒污染、能够实现高密度培养、病毒增殖水平更高且病毒包装稳定性更持久；该细胞株能够作为改良的替代宿主，用于生物制品及疫苗的的开发和商业化生产，能够更加安全地规避Sf‑RV病毒污染造成的潜在危险。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，特别是涉及一株无弹状病毒的Sf9-PT细胞及其应用。

背景技术

杆状病毒-昆虫细胞表达系统是重组蛋白表达的强大平台，已用于开发各种研究性生物制品和生产病毒疫苗。降低生物制品污染风险的综合策略仍然适用于产品安全，这包括产品制造中涉及的细胞系和细胞培养试剂等起始材料。由于昆虫在系统发育上与人类相距甚远，因此研究人员通常认为与使用哺乳动物细胞相比，使用昆虫来源的细胞系生产生物制品能更好地避免一些与外源病毒相关的安全问题。

Sf9细胞具有蛋白表达高、易于操作等优点，已成为真核蛋白表达应用最广泛的昆虫细胞系之一。然而，近年来美国生物制剂研究与评价中心发现，所有测试的Sf细胞均被一种新的外来病毒污染，即Sf-弹状病毒(Spodoptera frugiperda rhabdovirus，Sf-RV)。这一发现引起了人们对昆虫细胞-杆状病毒表达载体系统生产的生物制剂安全性的担忧。虽然目前没有证据表明Sf-RV病毒对人类或动物构成威胁，但是在生物制品制备过程中一旦发现任何外源病毒污染，都必须采取一切办法去除，保证生物制品的安全性。本实验室对Gibco来源的Sf9细胞进行了Sf-RV病毒检测，结果表明也污染了这种病毒。

目前，中国发明专利申请CN110423726A提供了一株无弹状病毒污染的Sf9-ZY细胞；中国发明专利申请CN114807009A涉及一株不依赖血清的无弹状病毒污染的Sf9-RF细胞；现有的无弹状病毒污染的Sf9细胞在生长特性、增殖水平、杆状病毒扩增能力以及病毒包装稳定性等方面均与商品化Sf9细胞无明显差异。

发明内容

基于此，本申请提供了一株高密度培养、杆状病毒扩增能力更高、包装稳定性更持久的无弹状病毒污染的Sf9-PT细胞。

根据本申请的一个方面，提供了一株无弹状病毒的Sf9-PT细胞，该细胞已于2023年03月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C202334。

本申请还提供一种上述保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞的应用，具体技术方案如下：

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在构建毒理学、生理学、分子遗传学或发育生物学的生物研究模型中的应用。

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在昆虫杆状病毒表达系统中的应用。

在其中一些实施例中，所述Sf9-PT细胞用于包装腺相关病毒。

在其中一些实施例中，所述Sf9-PT细胞用于表达重组蛋白。

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在研究杆状病毒基因组的结构与功能中的应用。

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在研究真核基因表达调控机制中的应用。

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在制备生物制品中的应用。

保藏编号为CCTCC NO:C202334的Sf9-PT细胞在制备重组病毒疫苗中的应用。

在其中一些实施例中，所述病毒疫苗包括重组新型冠状病毒疫苗、流行性乙型脑炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和禽流感疫苗。