[发明专利]一种灌注快速透明组织的方法

说明书

本发明提供一种灌注快速透明组织的方法，涉及组织三维重构研究技术领域，包含以下步骤：S1：选材：S2：经心灌注透明试剂；S3：检测透明后组织的各项物理数据。本发明利用小鼠全身循环系统，增加透明试剂与组织器官的接触，在保留原技术透明效果的同时，显著减少透明时长，数据分析的结果清晰可靠，实验方法简便易行。

技术领域

本发明涉及组织三维重构研究技术领域，尤其涉及一种灌注快速透明组织的方法。

背景技术

组织透明技术的问世是在20世纪初由WernerSpalteholz发明的，从此打开了该技术的大门，尤其是在近十年，由于荧光分子标记技术和显微镜技术的发展，组织透明技术呈现出井喷式的发展趋势，短短十几年涌现出几十种组织清除技术及其技术变种。组织透明技术是现代科技技术发展的综合交叉产物，也是一个高速发展的技术，更是一个应用特别广泛的技术，不仅应用于基础医学和生物学研究的各个领域，更广泛运用于临床的各个方面，因此组织透明技术具有广泛的应用价值和前景。该技术发展如此迅速肯定有别的技术无可取代的优势，那便是可以保持组织完整性的情况下，将组织透明化后对其进行三维成像，这对于正常组织的空间结构的理解或病理组织病理变化的理解都有极大的帮助。

由于组织成分包括水、蛋白质、脂质、矿物分子以及其他的一些色素分子，这些物质的折射率不同，且在不同的组织中含量不同，当光线进入组织时，会因为这些物质的存在而形成光吸收和光散射。组织透明技术通过脱脂、脱钙、脱色、脱水、折射率匹配等步骤使组织样本折射率达到一致，从而实现光学透明。

现有的组织透明技术主要分为三类。第一类为基于有机溶剂的组织透明技术，又称为疏水性组织透明技术，如DISCO技术；第二类为基于水凝胶技术的组织透明技术，如CLARITY技术；第三种为基于水溶性溶剂的组织透明技术，又称为亲水性组织透明技术，如CUBIC技术。其中由于亲水性组织透明技术所用试剂安全无毒，所以该技术应用广泛，变种最多。但其缺点明显，需要较长组织透明时间，实验周期长，透明效率低且透明后的组织会膨胀变形。

因此，需要一种能够提高组织透明效率、操作简单且经济实惠的组织透明技术。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中缺乏。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种灌注快速透明组织的方法，包含以下步骤：

S1：选材：

S2：经心灌注透明试剂；

S3：检测透明后组织的各项物理数据。

优选的，所述S1中选用成年雌性小鼠，麻醉处理后固定在操作台上，并对小鼠进行剖腹处理，暴露其心脏组织。

优选的，所述S2中具体步骤为：将输液针穿刺至小鼠心脏中，使用蠕动泵将透明试剂灌注至小鼠的心脏中。

优选的，所述透明试剂包括4℃生理盐水、4℃4％多聚甲醛、200ml37℃CUBIC-P试剂，三种试剂分别注射。

优选的，所述CUBIC-P试剂由5wt％1-甲基咪唑，10wt％正丁基二乙醇胺，5wt％TritonX-100组成。

优选的，灌注速度调节为14ml/min。

优选的，所述数据包括平均灰度值、透明前后体积及面积的变化。

上述所述的一种灌注快速透明组织方法，利用小鼠全身循环系统，增加透明试剂与组织器官的接触，显著减少透明用时，并解决了原技术透明后的膨胀问题，数据分析的结果清晰可靠，实验方法简便易行。

附图说明

图1为本发明一实施方式中一种灌注快速透明组织方法与被动浸泡CUBIC技术的流程图；