[发明专利]一种乳制品中植物源性成分的检测方法

说明书

本发明为一种乳制品中植物源性成分的检测方法。一种乳制品中植物源性成分的检测方法，包括以下步骤：(1)提取乳制品的DNA；(2)进行PCR扩增；(3)进行电泳检测。本发明所述的一种乳制品中植物源性成分的检测方法，基于PCR‑CE法和PCR‑AGE法，可有效检测出乳制品中植物源性成分，并且可满足不同商品化乳制品的检测需求。

技术领域

本发明属于乳制品技术领域，具体涉及一种乳制品中植物源性成分的检测方法。

背景技术

乳及乳制品中一种典型欺诈行为是使用廉价植物蛋白成分掺假，以提高乳中的蛋白质含量。据报道较多的被掺入的植物蛋白成分包括大豆分离蛋白、豌豆分离蛋白、小麦水解蛋白、大米水解蛋白。乳中植物蛋白质成分的微量掺入或者污染，就足以会引发消费者中过敏人群的严重过敏反应，极大地威胁了消费者的健康和食品安全。所以建立乳及乳制品中植物成分高灵敏度、高通量的筛查体系极为必要。

而目前所报道的检测方法中，检测靶标多为蛋白，能够检测的物种数最高也只是达到3-4个，如Jablonski等使用UPLC结合紫外指纹技术的曲线谱图技术识别脱脂奶粉(SMP)样品中掺杂3％(w/w)及以上质量分数存在的外源植物蛋白(大豆分离蛋白、豌豆分离蛋白、大米蛋白和小麦水解蛋白)。

有鉴于此，有鉴于此，本发明提出一种新的乳制品中植物源性成分的检测方法，是基于PCR-CE法和PCR-AGE法，可有效检测出乳制品中植物源性成分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乳制品中植物源性成分的检测方法，基于PCR-CE法和PCR-AGE法，可有效检测出乳制品中植物源性成分，并且可应用于鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉的掺假检测，满足不同商品化乳制品的检测需求。

为了实现上述目的，所采用的技术方案为：

一种乳制品中植物源性成分的检测方法，包括以下步骤：

(1)提取乳制品的DNA；

(2)进行PCR扩增；

(3)进行电泳检测。

进一步的，所述的乳制品为鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉。

进一步的，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应体系为：0.5ng/μL的DNA模板2μL，2xTaq MasterMixⅡ10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，无DNA酶RNA酶水7μL，总体积20μL。

进一步的，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应程序为：

进一步的，所述的步骤(2)中，PCR扩增中植物源通用引物的核苷酸序列为F:5’-CGAAAT CGGTAGACGCTACG-3’、R:5’-CCTGAAGT AAGAACCAGAT G-3’。

进一步的，所述的步骤(3)中，电泳检测为琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳。

再进一步的，所述的琼脂糖凝胶电泳中，植物体系的PCR扩增子用3％琼脂糖凝胶电泳还原。

再进一步的，所述的琼脂糖凝胶电泳中，电泳条件90V，60min，用凝胶成像仪成像，曝光时间0.2s。

再进一步的，所述的毛细管电泳过程中，对于每个PCR扩增产物用DilutionBuffer作10倍稀释后进行毛细管电泳。

再进一步的，所述的毛细管电泳过程中，采用高分辨率运行方法，样品注入时间10s，分离电压4kV，分离时间800s。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：