[发明专利]一种胚胎体外培养液及其在提高胚胎耐热性方面的应用

权利要求书

1.一种胚胎体外培养液，用于胚胎体外培养，以常规培养液为基质，其特征在于，还包括橄榄苦苷和丹酚酸B；所述常规培养液选自CZB培养液或人工合成输卵管液；所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为50-100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为100-300μg/mL。

2.根据权利要求1所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述基质中的所述橄榄苦苷的含量为100μg/mL；所述基质中的所述丹酚酸B的含量为300μg/mL。

3.根据权利要求1所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提高胚胎的耐热性。

4.根据权利要求3所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述胚胎为小鼠胚胎或牛胚胎；当所述胚胎为小鼠胚胎时，所述常规培养液选自CZB培养液；当所述胚胎为牛胚胎时，所述常规培养液选自人工合成输卵管液。

5.根据权利要求4所述的胚胎体外培养液，其特征在于，所述小鼠胚胎来自昆明系小鼠输卵管冲取的胚胎；所述牛胚胎由奶牛卵母细胞体外成熟培养、体外受精获得。

6.根据权利要求1-5任一项所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用。

7.根据权利要求6所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，所述胚胎体外培养液通过提高胚胎的抗氧化水平来提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，从而提高胚胎的耐热性。

8.根据权利要求7所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，采用所述胚胎体外培养液对所述胚胎进行体外培养时，所述橄榄苦苷和所述丹酚酸B通过提高胚胎内SOD活性且减少MDA含量来提升胚胎受热应激时的发育率和囊胚孵出率，从而提高胚胎的耐热性。

9.根据权利要求6所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，当所述胚胎为小鼠胚胎时，包括以下步骤：

以CZB培养液为基础培养液，向基础培养液中添加橄榄苦苷和丹酚酸B，得到小鼠胚胎体外培养液，将上述小鼠胚胎体外培养液在培养皿中做60μl/滴的培养微滴，覆盖矿物油后置39℃含有5％CO₂饱和湿度的培养箱平衡4h以上；获取小鼠胚胎，除去胚胎周围颗粒细胞后放入培养微滴中，在39℃含5％CO₂的CO₂培养箱中培养，在胚胎发育至4细胞时移入含有1％葡萄糖的培养液中，每24h换液一次，直至胚胎发育至囊胚期。

10.根据权利要求6所述的胚胎体外培养液在提高胚胎耐热性方面的应用，其特征在于，当所述胚胎为牛胚胎时，包括以下步骤：

以SOF培养液为基础培养液，向基础培养液中添加橄榄苦苷和丹酚酸B，得到牛胚胎体外培养液，于培养前2h，在培养皿中，用上述牛胚胎体外培养液做成60μL的培养微滴，覆盖矿物油后置41℃含有5％CO₂饱和湿度的CO₂培养箱中平衡，将体外受精获得的早期牛胚胎移入含有200μL培养液的1.5mL离心管中，震荡45s，去除颗粒细胞，再用牛胚胎体外培养液充分洗涤，之后进行培养，向每个培养微滴中移入25个早期胚胎，将培养皿置于41℃含5％CO₂的CO₂培养箱中培养，每隔48h半量更换牛胚胎体外培养液。