[发明专利]鸡冠油组织脱细胞基质材料及其制备方法

权利要求书

1.鸡冠油组织脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）剥离鸡冠油组织表面脂质体，得到去脂鸡冠油组织膜片，用PBS漂洗；

（2）步骤（1）中鸡冠油组织膜片用酶溶液浸泡，用PBS漂洗；

其中，所述酶溶液为胰蛋白酶-EDTA溶液和/或胰蛋白酶-Tris-HCl溶液；

（3）步骤（2）中鸡冠油组织膜片用脱细胞液浸泡，用PBS漂洗，冻干，得到鸡冠油组织脱细胞膜片；

其中，所述脱细胞液为TritonX-100、SDS、脱氧胆酸盐、TritonX-200、Chaps、SB-10、SB-16、TBP、EGTA中的一种或多种组合；

（4）将步骤（3）中冻干的鸡冠油组织脱细胞膜片置于交联剂中进行交联，用PBS漂洗，最后灭菌，得到鸡冠油组织脱细胞基质材料；

其中，所述交联剂为EDC、京尼平、戊二醛、己异二氰酸酯、叠氮二苯基磷中的一种或多种组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述酶溶液为胰蛋白酶-EDTA溶液，其中胰蛋白酶浓度为0.5%，EDTA浓度为0.01%-0.05%。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述脱细胞液为0.1-10g/LTritonX-100。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）冻干方式为真空冷冻干燥；

其中，真空冷冻干燥的条件为：-30℃--40℃预冻6-10h；第一次干燥，-10℃-0℃，12-24h；第二次干燥，20℃-40℃，5-12h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）所述交联剂为0.1%-5%戊二醛。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）灭菌方式为Co60辐照、电子束、环氧乙烷中的一种或多种组合。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，灭菌方式为Co60辐照，辐照剂量为1-50KGy。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、用物理方法剥离鸡冠油组织表面脂质体，得到去脂鸡冠油组织膜片，用PBS漂洗；

S2、将步骤S1获得的鸡冠油组织膜片用酶溶液于37℃浸泡12h，然后用PBS漂洗；

其中，所述酶溶液为胰蛋白酶-EDTA溶液，其中胰蛋白酶浓度为0.5%，EDTA浓度为0.01%-0.05%；

S3、将步骤S2获得的鸡冠油组织膜片用脱细胞液于4℃-37℃浸泡4-12h，用PBS漂洗后，冻干，得到鸡冠油组织脱细胞膜片；

其中，所述脱细胞液为0.1-10g/L TritonX-100；

S4、将步骤S3获得的鸡冠油组织脱细胞膜片置于交联剂中，于4℃-37℃交联2-12h，用PBS漂洗后，进行Co60辐照灭菌，辐照灭菌剂量为1-50KGy，得到鸡冠油组织脱细胞基质材料；

其中，所述交联剂为0.1%-5%戊二醛。

9.按照权利要求1-8任一项所述方法制备得到的鸡冠油组织脱细胞基质材料。

10.根据权利要求9所述的鸡冠油组织脱细胞基质材料，其特征在于，拉伸强度为1-15N/cm，孔径100-200mm，孔隙率为50-98%，DNA残留2-20mg/g。