[发明专利]一种基于Ce44基因鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光定量PCR方法及其应用

说明书

本发明公开一种基于Ce44基因鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光定量PCR方法及其应用，通过基于SYBR Green的实时荧光定量技术，利用油莎豆植物基因组的单拷贝基因作为标记基因，建立具有特异性强、灵敏度高的油莎豆成分检测方法。本发明建立的方法可以准确区分油莎豆与4种莎草科植物及其它12种代表性植物，对6种市场上的食品样品进行实际检测，可准确判断出是否含有油莎豆成分。本发明建立的油莎豆特异性实时荧光定量PCR检测方法可以为油莎豆制品中油莎豆成分的定性、定量检测提供技术参考。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种基于Ce44基因鉴定油莎豆成分的SYBRGreen荧光定量PCR方法及其应用。

背景技术

油莎豆(学名：Cyperus esculentus L.，英文名：tiger nut)，特别是其块茎进行全方位的食用产品开发已成为各国油莎豆利用研究的热点。印度、阿尔及利亚、法国、西班牙等国对油莎豆食用价值的开发研究工作起步较早，已制成糕点、糖果、饮料等各种制品进行销售。而我国对油莎豆的开发利用工作较为滞后，研究主要集中在栽培技术、营养分析和油脂提取等方面，对油莎豆除油用以外的食用产品开发研究还处于起步阶段。

由于传统压榨设备和工艺出油率较低，油莎豆油脂精炼工艺和装备匮乏，导致油莎豆制备成本很高，且油莎豆的营养价值高，市场上很多不法商贩为了获取高额利润，会以低价值的产品混入或冒充高价值的产品。市面上流通的标注油莎豆的产品经过加工后，从外观通常难以辨别，比如比如以大豆粉冒充油莎豆粉，从外观上无法辨别，而其营养价值大大降低，消费者不能获得所需营养价值的同时也受到了欺骗。

因此建立一种可以特异地检测油莎豆成分的方法，有助于油莎豆成分的鉴定，防止冒充，保护消费者利益和健康。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，发明人通过多次、反复的实验和摸索获得了能够代表油莎豆的基因组拷贝数和细胞数DNA分子标记，设计出灵敏度高，特异性好的扩增引物并摸索出适合该引物的扩增体系和程序，建立能精确鉴定和定量检测产品中油莎豆成分的SYBR Green荧光定量PCR方法。

本发明一个方面提供了一种鉴定油莎豆成分的引物组合物，其特征在于，所述引物为上游引物Ce44-F40和下游引物Ce44-R147，所述上游引物Ce44-F40的序列如SEQ IDNO.1，所述下游引物Ce44-R147的序列如SEQ ID NO.2。所述引物和探针的具体序列为：

SEQ ID NO.1：GCCAT TTTAC TTGTAGTGGT GTTCA 25，

SEQ ID NO.2：TCGGC TCGTC ATTTC TTCG 19。

本发明另一个方面提供了一种鉴定油莎豆成分的SYBR Green荧光PCR方法，所述SYBR Green荧光定量PCR方法采用上述引物组合物和SYBR Green的扩增体系中进行扩增。

进一步地，所述SYBR Green荧光PCR方法具体包含以下步骤：

S1)获得待鉴定样本的基因组DNA；

S2)采用包含上述引物组合物实时荧光定量PCR反应体系对步骤1)中提取的基因组DNA进行扩增；

S3)出现特异性扩增的样本，则确认待鉴定样本中含有油莎豆成分。

进一步地，S2)中实时荧光定量PCR反应体系中还包含SYBR Green。

进一步地，所述步骤S2)中的反应体系为：DNA模板1μL，qPCR SYBR Green MasterMix 10μL，10μM正、反向引物各0.4μL，加ddH₂O补足至20μL。

进一步地，S2)中扩增的Ct值小于40，例如小于38或36。