[发明专利]ULK1抑制剂在体外减少CAR-T细胞耗竭、降低活化水平中的应用

说明书

本发明公开了ULK1抑制剂在体外减少CAR‑T细胞耗竭、降低活化水平中的应用。本发明提供了一种基于ULK1抑制剂的CAR‑T细胞和制备方法，以及ULK1抑制剂预处理的CAR‑T细胞在抗肿瘤中的应用，该方法简单易行，通过在CAR‑T细胞培养过程中添加ULK1抑制剂治疗肿瘤，能够明显的增加免疫细胞持续性及杀伤功能，很大程度上解决了细胞治疗过程中的难治复发问题，延长患者的生存期。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及ULK1抑制剂在体外减少CAR-T细胞耗竭、降低活化水平中的应用。

背景技术

嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T-cell therapy，CAR-T)细胞疗法被用于治疗难治性或复发的白血病和淋巴瘤。然而，仍有部分患者在接受CAR-T免疫治疗后未能完全缓解或者治疗后出现复发。现有研究认为CAR-T细胞在体内耗竭，丧失效应功能是引起复发的重要原因之一。因此，提高CAR-T细胞体内的持久性成为了亟需解决的技术问题。

一些小分子抑制剂在体外与CAR-T细胞进行共培养能够起到减少CAR-T细胞在体内耗竭的作用。比如，公开号为CN113462649A的发明公开了MEK抑制剂在减少CAR-T细胞耗竭和终末分化中的应用。所述MEK抑制剂为曲美替尼。在CAR-T细胞培养过程中，加入MEK抑制剂处理，能够减少CAR-T细胞耗竭和终末分化，从而使CAR-T细胞体内持久性更好，抗肿瘤作用更强。再比如，公开号为CN110157680A的发明申请公开了通过添加络氨酸激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)减少CAR-T细胞活化信号传递，抑制了CAR-T细胞的终末分化，提高了CAR-T细胞制品中的初始T细胞和中心记忆T细胞的比例，同时抑制CAR-T细胞的耗竭倾向。

细胞自噬是真核生物在进化过程中高度保守、基于溶酶体的一种胞内降解途径，对维持细胞和生物体的稳态平衡有重要作用。最近有越来越多的研究证明，自噬途径参与免疫细胞的存活和凋亡、分化、激活、效应器功能等多种生物学过程。CD8阳性T细胞遇到抗原时，自噬的缺陷有助于其促进效应功能的执行，CD4阳性T细胞的记忆性也有赖于自噬引起的线粒体功能和脂质代谢状态改变。因此，自噬在免疫治疗中是一个复杂但很有前景的靶点。

ULK1抑制剂SBI-0206965，CAS号为1884220-36-3，结构式如式I所示。

发明内容

针对现有技术中存在的上述不足，本发明提供了ULK1抑制剂在体外减少CAR-T细胞耗竭、降低活化水平中的应用。

本发明首先提供了ULK1抑制剂在体外减少CAR-T细胞耗竭、降低活化水平中的应用。优选的，ULK1抑制剂为SBI-0206965。SBI-0206965的使用浓度为3μM。优选的，ULK1抑制剂在CAR-T细胞体外培养的第6～9天加入培养基。

本发明又提供了一种CAR-T细胞体外培养方法，在CAR-T细胞体外培养的第6～9天向培养基中加入ULK1抑制剂。优选的，ULK1抑制剂为SBI-0206965。SBI-0206965的使用浓度为3μM。

本发明还提供了ULK1抑制剂在制备抗癌药物中的应用，所述ULK1抑制剂与CAR-T细胞联用，ULK1抑制剂通过减少CAR-T细胞耗竭、降低活化水平从而提高抗癌作用。其中，所述ULK1抑制剂为SBI-0206965。

本发明的有益效果为：本发明提供了一种基于ULK1抑制剂的CAR-T细胞和制备方法，以及ULK1抑制剂预处理的CAR-T细胞在抗肿瘤中的应用，该方法简单易行，通过在CAR-T细胞培养过程中添加ULK1抑制剂治疗肿瘤，能够明显的增加免疫细胞持续性及杀伤功能，很大程度上解决了细胞治疗过程中的难治复发问题，延长患者的生存期。

附图说明

图1为ULK1抑制剂培养CAR-T细胞亚群分化比例和统计图。