[发明专利]一株高效降解3-苯氧基苯甲酸的基因工程菌在审

专利信息
申请号: 202310245048.8 申请日: 2023-03-14
公开(公告)号: CN116410911A 公开(公告)日: 2023-07-11
发明(设计)人: 李琴;周巧;陈媛;刘书亮;李建龙;胡凯弟 申请(专利权)人: 四川农业大学
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/64;C12N9/00;C12R1/19
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 625014 四*** 国省代码: 四川;51
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摘要:
搜索关键词: 高效 降解 苯氧基 苯甲酸 基因工程
【权利要求书】:

1.一株高效降解3-苯氧基苯甲酸(3-PBA)的基因工程菌,其特征在于,3-PBA降解酶基因sca来源于鞘氨醇单胞菌SC-1。

2. 根据权利要求1所述的3-PBA降解酶,其特征在于,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的一株高效降解3-PBA的基因工程菌,其特征在于,构建方法包括如下步骤:

(1)设计引物,以鞘氨醇单胞菌SC-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得sca基因序列;

(2)将基因sca连接至克隆载体pMD18-T,获得克隆质粒pMD18-T-sca

(3)以克隆质粒pMD18-T-sca为模板,通过PCR扩增获得sca基因,并将其插入表达载体pET28a(+),获得重组质粒pET28a(+)-sca

(3)将重组质粒pET28a(+)-sca转入至感受态细胞E. coli BL21(DE3)中,获得基因工程菌E. coli BL21(DE3)- pET28a(+)-sca

4. 根据权利要求1要求所述的基因工程菌对3-PBA的降解,其特征在于,按1%-5%接种量接入到LB培养基于,37℃、160 rpm振荡培养3.5 h,添加IPTG,20℃诱导16 h后,添加20mg/L的3-PBA,利用高效液相色谱(HPLC)检测基因工程菌降解3-PBA情况。

5. 根据权利要求1所述,一株高效降解3-PBA的基因工程菌,其特征在于,该工程菌在6h对20 mg/L的3-PBA降解率达76.18%,24 h能完全降解。

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