[发明专利]一种组合物、试剂盒及检测大肠杆菌细胞基因组DNA的方法和应用在审
| 申请号： | 202310235769.0 | 申请日： | 2023-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN116555452A | 公开（公告）日： | 2023-08-08 |
| 发明（设计）人： | 吴言华;张双宇;刘玉方;李晓晨;孙克非 | 申请（专利权）人： | 天根生化科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京维正专利代理有限公司 11508 | 代理人： | 朱欣欣 |
| 地址： | 102299 北京市昌平区科技园区双*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 组合 试剂盒 检测 大肠杆菌 细胞 基因组 dna 方法 应用 | ||
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括引物和探针，所述引物选自A1~A5；
A1：上游引物序列F1如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列R1如SEQ ID NO:3所示；
A2：上游引物序列F2如SEQ ID NO:5所示，下游引物序列R2如SEQ ID NO:6所示；
A3：上游引物序列F3如SEQ ID NO:8所示，下游引物序列R3如SEQ ID NO:9所示；
A4：上游引物序列F4如SEQ ID NO:11所示，下游引物序列R4如SEQ ID NO:12所示；
A5：上游引物序列F5如SEQ ID NO:14所示，下游引物序列R5如SEQ ID NO:15所示。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述探针选自探针序列P1~P5；
探针序列P1如SEQ ID NO:4所示；
探针序列P2如SEQ ID NO:7所示；
探针序列P3如SEQ ID NO:10所示；
探针序列P4如SEQ ID NO:13所示；
探针序列P5如SEQ ID NO:16所示。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记猝灭基团；所述荧光基团选自FAM、ROX、VIC、CY5、CY3、HEX、5-TAMRA、TET和JOE；
优选地，所述荧光基团为FAM，所述猝灭基团为BHQ1。
4.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-3中任一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR缓冲液、盐离子、dNTPs、DNA聚合酶中的至少一种；
优选地，所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶；
优选地，所述盐离子为Mg2+。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR增强剂；
以及DNA提取试剂和/或核酸纯化试剂。
7.一种检测大肠杆菌细胞基因组DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品置于PCR扩增体系中进行扩增反应；
所述PCR扩增体系包括权利要求1-3中任一项所述的组合物或利用权利要求4-6中任一项所述的试剂盒配制而成。
8.根据权利要求7所述的检测大肠杆菌细胞基因组DNA的方法，其特征在于，所述PCR扩增体系中，上游引物序列、下游引物序列和探针的摩尔比为（4-10）：（4-10）：（3-6）；
优选地，所述上游引物序列、所述下游引物序列和所述探针的摩尔比为（4-6）：（4-6）：（3-5）。
9.根据权利要求7或8所述的检测大肠杆菌细胞基因组DNA的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的条件为：90℃-97℃、0.8-1.5min，1个循环；90℃-97℃、3-10s，55-65℃、10-20s，38-42个循环。
10.如权利要求1-3中任一项所述的组合物、权利要求4-6中任一项所述的试剂盒在检测生物制品中大肠杆菌细胞基因组DNA中的应用。
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