[发明专利]检测样品中脂溶性维生素的方法

说明书

本发明提供了一种检测样品中脂溶性维生素的方法，所述方法包括使聚合物尤其是苯乙烯基聚合物包覆的磁珠接触样品的步骤。所述方法可用在质谱和液相色谱的样品制备及前处理中。本发明还提供了所述磁珠用于检测样品中脂溶性维生素的用途以及用于检测样品中脂溶性维生素的试剂盒。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及样品中脂溶性维生素的检测方法。

背景技术

脂溶性维生素是指不溶于水而溶于脂肪类有机溶剂的维生素，包括例如维生素A、维生素D、维生素E和维生素K，其中维生素D包括例如维生素D₂和维生素D₃。脂溶性维生素的作用多种多样，除了直接参与和影响特异性的代谢过程外，它们多半还与细胞内核受体结合，影响特定基因的表达。脂溶性维生素在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。合理的维生素水平对维持人体健康十分重要，准确测定人体中脂溶性维生素的含量，可以指导人们科学合理的补充维生素，预防疾病，提高生活质量，同时对脂溶性维生素缺乏或过量的临床判断、 治疗管理和生理评估具有辅助诊断的意义。对于脂溶性维生素的测定是临床样品中的一项重要任务。

目前，临床上在测定样品中的脂溶性维生素时，由于临床样品成分复杂，不能直接进行检测，需要首先进行前处理，使样品进行适当的分离和纯化后才有可能进入后面的分析程序。现有技术中采用的脂溶性维生素的前处理方法包括蛋白沉淀(PPT)、液液萃取法(LLE)、固相萃取法(SPE)等。然而，现有技术中的前处理方法存在着无法实现自动化和/或无法同时实现脂溶性维生素A、D、E、K的有效检测的缺点。

CN113376270B公开了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品的蛋白沉淀的前处理方法，包括采用负压装置处理的步骤。此方法操作简单，但由于蛋白沉淀实质是对样本进行的稀释，因此上机样本中待测物的浓度偏低，对测定仪器的灵敏度要求高；而且，方法中需要负压操作，不利于实现操作流程全自动化。CN110779780A公开了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中脂溶性维生素的样品前处理方法，其使用乙醇进行蛋白沉淀，并使用正己烷进行液液萃取、氮气吹干萃取液、样品复溶才可将样品进样分析。该方法实验过程中涉及到萃取、氮吹等步骤，需要大量人工操作，不利于处理自动化；而且操作过程繁琐，对实验人员的要求高。CN111198238A公开的血清中维生素D的萃取方法及检测方法，该方法首先对样品进行蛋白沉淀，然后再将沉淀的混合溶液上样至活性炭96孔板上，使用正己烷等强挥发试剂进行洗脱，氮气吹干洗脱液后进行样品的复溶，随后利用固相萃取法选择性吸附目标物。然而，实验中固相萃取填料接触到有机试剂之后会产生溶胀现象，会影响溶液通过固相萃取填料的流速，从而产生孔间均一性差的问题，而且氮气吹干的处理也不利于处理自动化。CN114487209A公开了一种利用磁性固相萃取材料检测血清中脂溶维生素A、维生素D和维生素E的检测方法，该方法利用了外加磁场和磁性固相萃取填料（亲水亲脂平衡型磁性固相萃取磁珠，HLB磁珠），然而，该方法对维生素A的检测灵敏度不高且无法对维生素K进行检测。

因此，当前已有的方法尚不能实现对样品中脂溶性维生素A、D、E、K的灵敏有效和/或自动化检测。临床检测客观上要求提供一种能克服上述现有技术中的至少一个问题，特别是能有效检测脂溶性维生素的方法；并优选地能够进一步实现检测的自动化。

发明内容

本发明人通过大量实验研究意外发现，通过采用聚合物包覆的磁珠（尤其是疏水聚合物磁珠）接触样品，可以实现对多种脂溶性维生素的检测，实现高的检测灵敏度，并可进一步实现包括维生素K在内的多种脂溶性维生素的同时检测。

基于此发现，在本发明的第一个方面，提供了一种检测样品中目标分析物的方法，包括使聚合物包覆的磁珠接触样品的步骤，其中所述目标分析物优选是脂溶性维生素。

本发明所述的磁珠是一种磁性颗粒，其具有磁性核心和包覆在所述磁性核心表面的包被材料，所述包被材料是聚合物材料，尤其是疏水聚合物，例如烷基修饰的硅胶或苯乙烯基聚合物，所述烷基修饰的硅胶例如是C18或C8烷基修饰的硅胶，所述苯乙烯基聚合物例如是苯乙烯-二乙烯苯共聚物。