[发明专利]抗GPC3抗体

说明书

本发明涉及抗GPC3抗体。本发明的课题在于提供：与现有的抗体(例如GC33、GC199)识别不同的表位、并且即使在单链抗体的状态下也可以与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合的抗GPC3抗体；含有所述抗GPC3单链抗体的CAR；表达所述CAR的免疫活性细胞；上述抗GPC3抗体基因或CAR基因；含有所述抗GPC3抗体基因或CAR基因的载体；导入有所述载体的宿主细胞；特异性检测GPC3的方法；以及用于特异性检测GPC3的试剂盒。含有权利要求1中所定义的特定的重链CDR1～3和特定的轻链CDR1～3且与来源于人的GPC3多肽特异性结合的抗体与局部存在于细胞膜的GPC3特异性结合。基于含有所述单链抗体的CAR制作的CAR‑免疫活性细胞在癌症免疫疗法中有用。

本申请是申请日为2018年1月10日、申请号为201880006069.1(国际申请号为PCT/JP2018/000257)、发明名称为“抗GPC3抗体”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及：与GPC3(Glypican-3，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)特异性结合的抗体(抗GPC3抗体)；含有抗GPC3单链抗体、融合于所述抗GPC3单链抗体的羧基(C)末端的跨膜区和融合于所述跨膜区的C末端的免疫活性细胞活化信号转导区的嵌合抗原受体(ChimericAntigen Receptor：以下也称为“CAR”)；表达CAR的免疫活性细胞；抗GPC3抗体基因或CAR基因；含有抗GPC3抗体基因或CAR基因的载体；导入有所述载体的宿主细胞；检测GPC3的方法；以及用于检测GPC3的试剂盒。

背景技术

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在胚胎组织、特别是肝脏和肾脏中表达，是与器官形成相关的细胞外基质蛋白。在成人组织中，在胎盘以外观察不到GPC3的表达，但是在肝细胞癌、黑素瘤、卵巢透明细胞癌、肺鳞状细胞癌等各种癌组织中观察到表达。可见，GPC3与甲胎蛋白(α-fetoprotein；AFP)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen；CEA)等蛋白质同样地是在胚胎组织中表达的蛋白质，因此被归类为胚胎性癌抗原。即，GPC3显示出在正常组织细胞中不表达、但在癌细胞中特异性表达的特征，因此作为癌症治疗的靶分子、肿瘤标志物及诊断标志物有用。

GPC3是作为器官形成中的细胞外基质发挥细胞粘附作用、或作为细胞生长因子的受体起作用的蛋白聚糖家族之一。在位于GPC3的羧基(C)末端侧的第560位的丝氨酸上添加有GPI(Glycosylphosphatidylinositol，糖基磷脂酰肌醇)锚。GPI锚担负着与细胞膜脂质形成共价键而使GPC3局部存在于细胞表面上的作用。另外，GPC3的第495位的丝氨酸和第509位的丝氨酸被硫酸乙酰肝素链(HS链)进行了修饰。已知HS链调节Wnt信号、FGF信号、BMP信号等多个生长信号转导途径。已知相关的生长信号转导途径根据癌症种类而有所不同，例如，肝细胞癌(HCC)中，刺激Wnt信号途径而进行细胞增殖。作为磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族共通的特征，在胞外域富含16个半胱氨酸，认为形成多个分子内二硫键而有助于立体结构形成的稳定化。据报道，细胞膜表面的GPC3有可能被弗林蛋白酶转化酶(furinconvertase)在第358位的精氨酸(R)和第359位的丝氨酸(S)之间(R358/S359)切断。但是，GPC3的氨基(N)末端亚基由于通过分子内二硫键发生了交联，因此认为，即使在被弗林蛋白酶转化酶切断为N末端侧亚基及C末端侧亚基这两部分时，可能两者也不解离、而是保持全长型的结构，关于可溶性GPC3的结构尚无定论。可见，局部存在于细胞膜的GPC3的立体结构也包括GPC3的同种型的结构在内，不明之处仍较多。

由于细胞膜上的GPC3的结构复杂，因此认为，在制作针对GPC3的抗体时期望以最简单的结构区域为表位。作为现有的抗GPC3抗体的代表，有BioMosaics,Inc.所销售的单克隆抗体1G12。该抗体为如下得到的抗体：将避开GPC3的复杂结构、局部存在而设计的抗原(GPC3的C末端侧70个残基的多肽)免疫于Balb/c小鼠，制作杂交瘤，通过使用该抗原的筛选而得到。另外，日本国内制药厂家所开发的抗体GC33及GC199也是基于同样的构思而建立的单克隆抗体，是以GPC3的C末端侧部分片段为抗原而得到的抗体(专利文献1)。