[发明专利]一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括过敏原刺激物、细胞因子标准品、细胞因子的包被抗体和细胞因子的检测抗体；所述过敏原刺激物包括过敏原提取物和/或过敏原组分蛋白。

2.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述过敏原包括屋尘螨、粉尘螨、疥螨、蟑螂、蜜蜂、猫、马、蛔虫、桦树、柳杉、杉木、梯牧草、欧蓍草、黑麦草、女贞、大麦、苹果、花生、蟹、虾、扁豆、鲭鱼、牡蛎和糠秕马拉色菌。

3.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-13和IL-17A。

4.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中过敏原刺激物的终浓度为5～100μg/ml。

5.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PBS缓冲液、清洗液、非特异性封闭液、链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶溶液、底物溶液和终止液。

6.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述清洗液为含0.05％吐温20的PBS缓冲液；所述非特异性封闭液为含3％BSA的清洗液；所述底物溶液为3,3,5,5-四甲基联苯胺溶液；所述终止液为2M的硫酸溶液。

7.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测对象为血液样本。

8.权利要求1～7任一项所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将过敏原刺激物加入细胞培养板，每孔加入待测血液样本混匀，经孵育、离心，吸取细胞培养上清液；

(2)将步骤(1)所得细胞培养上清液、细胞因子标准品加入含有待检细胞因子的包被抗体的孔板中，经孵育、清洗液清洗后，向孔板中加入细胞因子的检测抗体，孵育、清洗；

(3)接着向孔板中加入链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶溶液，经孵育、清洗后，再加入底物溶液，经孵育后，加入终止液，终止反应；

(4)将孔板置于酶标仪上读取450nm、570nm处的OD值，依据标准曲线计算细胞因子的浓度，基于细胞因子的浓度对过敏等级以及炎症反应分型进行判定。

9.权利要求1～7任一项所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒在过敏原筛查中的应用，其特征在于，基于试剂盒检测到的待检样本的细胞因子的浓度对是否过敏及过敏等级进行判定；

判定标准如下：细胞因子浓度8pg/mL，则判定为阴性，指示待检样本对所检过敏原不过敏；细胞因子浓度≥8pg/mL，则判定为阳性，指示待检样本对所检过敏原过敏；

过敏等级如下：

1级：8pg/mL～12pg/mL；

2级：13pg/mL～17pg/mL；

3级：18pg/mL～22pg/mL；

4级：23pg/mL～32pg/mL；

5级：33pg/mL～52pg/mL；

6级：≥53pg/mL。

10.权利要求1～7任一项所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒在过敏原引起的炎症反应分型中的应用，其特征在于，基于试剂盒检测到的待检样本的细胞因子的类型及浓度对炎症反应分型进行判定，判定标准如下：

细胞因子中IL-4、IL-5、IL-13中任一项的浓度大于等于8pg/mL，则炎症反应分型为Th2型；细胞因子中IL-17A的浓度大于等于8pg/mL，则炎症反应分型为Th17型。