[发明专利]一株兔源丁酸梭菌CW3及其分离筛选方法和应用

说明书

本发明涉及兽医微生物技术领域,尤其涉及一种兔源丁酸梭菌CW3及其分离筛选方法和应用。该兔源丁酸梭菌CW3(保藏编号：CGMCC No.26406，保藏日期：2023年1月6日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)具有较强的产丁酸和抑菌性能，并具有良好的安全性和耐受性，能够降低断奶仔兔的死亡率、预防仔兔腹泻并保护动物肠道健康，在兔业养殖中具有广阔的前景。

技术领域

本发明涉及兽医微生物技术领域，尤其涉及一株兔源丁酸梭菌CW3及其分离筛选方法和应用。

背景技术

2020年起，抗生素被禁止用于饲料添加使用。而在众多的替抗产品中，微生态制剂因其安全性和有效性而备受关注。家兔产业在我国近年来发展迅速，断奶仔兔腹泻一直是养兔业中的一个难题，而目前市场上的众多益生菌类多来源于人猪鸡，很少有直接来源于兔的，再加上兔肠道的特殊性，因此微生态制剂在兔业中的发展受到限制。因此，寻找安全、抗菌性强、抑菌谱广的益生菌是改善仔兔腹泻的一个重要方向。

丁酸梭菌是一种专性厌氧的革兰氏阳性梭状芽孢杆菌，主要存在于人和动物的消化道、土壤以及窖泥中。丁酸梭菌能够产生多种营养物质和短链脂肪酸等，能够维持肠道菌群平衡、增强肠道免疫。此外，相比于乳酸菌和双歧杆菌等常见益生菌来说，丁酸梭菌可产生内生孢子，对外界环境和动物消化道环境具有较强的耐受性，因此，被认为是优质的益生菌。丁酸梭菌作为饲料添加剂，可促进动物生长发育，提升动物生产性能，增强机体免疫功能，对沙门氏菌和产气荚膜梭菌等多种致病菌引起的感染具有较强的保护作用。

丁酸梭菌在动物肠道内产生的乙酸、丁酸等短链脂肪酸能够被肠道细胞直接利用，是肠道动力的直接来源。丁酸梭菌分泌的有机酸可以使肠腔pH值下降，抑制病原微生物的繁殖，减少肠道毒素，降低腹泻发生率。丁酸梭菌能够促进双歧杆菌和乳杆菌等肠道益生菌的增殖，抑制大肠杆菌和产气荚膜梭菌等致病菌的生长，对畜禽肠道屏障功能具有良好的修复和增强效果，可以作为饲用微生态制剂，在畜禽养殖业中具有良好的应用潜力。目前丁酸梭菌的报道多分离自人、鸡和猪的肠道，但来源于家兔肠道的分离还较少。家兔属于单胃食草性动物，盲肠发达。由于家兔特殊的盲肠结构及“食粪性”的特点，其肠道内的微生物必演化出自己独特的代谢途径，其肠道微生物也会别于其他来源的微生物。

发明内容

本发明提供了一株兔源丁酸梭菌CW3及其分离筛选方法和应用，该兔源丁酸梭菌CW3经鉴定为丁酸梭菌(Clostridium butyricum)，具有较强的产丁酸和抑菌性能，并具有良好的安全性和耐受性，能够降低断奶仔兔的死亡率、预防仔兔腹泻并保护动物肠道健康，在兔业养殖中具有广阔的前景，解决了现有技术中存在的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案之一是：

一株兔源丁酸梭菌CW3，分类命名为：丁酸梭菌(Clostridium butyricum)CW3，已于2023年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCCNo.26406，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路一号院三号中国科学院微生物研究所。

本发明采用的技术方案之二是：

一株兔源丁酸梭菌CW3的分离筛选方法，包括如下步骤：

(1)兔源丁酸梭菌的分离纯化：

将采集的肉兔粪便样品加入生理盐水中，摇床过夜，收集悬液，水浴处理后，用RCM培养基(强化梭菌培养基)从样品中分离出耐热菌株，通过平板划线法纯化菌株；对纯化后菌株进行革兰氏染色实验，选取革兰氏染色为阳性的菌株；

(2)兔源丁酸梭菌的鉴定：将分离纯化的菌落分别加入生化鉴定管中反应，选择生化鉴定结果符合《伯杰细胞鉴定手册》中对丁酸梭菌的描述的菌株；进行了微生物质谱鉴定及16SrRNA鉴定，选择结果显示为丁酸梭菌的菌落；

(3)兔源丁酸梭菌的筛选：