[发明专利]一种内质网靶向人工蛋白、重组酿酒酵母、内质网靶向囊泡、免疫佐剂和疫苗

权利要求书

1.一种内质网靶向人工蛋白，其特征在于，从N端到C端，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述内质网靶向人工蛋白的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

3.一种重组酿酒酵母，其特征在于，以ura3缺陷型的酿酒酵母作为原始细胞，包含重组质粒；所述重组质粒插入有权利要求2所述编码基因。

4.权利要求1所述的人工蛋白或者权利要求2所述的编码基因或者权利要求3所述的重组酿酒酵母在制备内质网靶向囊泡中的应用。

5.一种内质网靶向囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求3所述的重组酿酒酵母接种于SC-Gal培养基，进行第一诱导培养；

将第一诱导培养后的重组酿酒酵母接种于不含无氨基酵母氮源的SC-Gal培养基，进行第二诱导培养；

对所述第二诱导培养后的培养物进行离心，收集沉淀的酵母细胞，提取酵母细胞的原生质体，得到酵母原生质体；

对所述酵母原生质体依次进行破碎和超速离心，收集沉淀，得到内质网靶向囊泡粗品；

采用镍柱对所述囊泡粗品进行纯化，得到内质网靶向囊泡；

所述SC-Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：无氨基酵母氮源6.7g/L、半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；

所述不含无氨基酵母氮源的SC-Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；

所述混合氨基酸包括以下质量份的组分：L-脯氨酸2份、L-亮氨酸10份、L-缬氨酸2份、L-丙氨酸2份、L-丝氨酸2份、L-赖氨酸2份、L-谷氨酸2份、L-甲硫氨酸2份、L-苏氨酸2份、L-谷氨酰胺2份、L-甘氨酸2份、L-异亮氨酸2份、L-色氨酸2份、L-天冬氨酸2份、L-酪氨酸2份、L-苯丙氨酸2份、肌醇2份、L-半胱氨酸2份、对氨基苯甲酸2份、L-天门冬酰胺2份和腺嘌呤0.5份。

6.一种内质网靶向磁性囊泡，其特征在于，包括磁性介孔硅纳米粒子和包被在所述磁性介孔硅纳米粒子孔道内的内质网靶向囊泡，所述内质网靶向囊泡由权利要求5所述制备方法制备得到。

7.根据权利要求6所述的内质网靶向磁性囊泡，其特征在于，所述磁性介孔硅纳米粒子的内核为MnFe₂O₄纳米粒子；所述磁性介孔硅纳米粒子的外壳为介孔二氧化硅；

所述磁性介孔硅纳米粒子的制备方法包括以下步骤：

将MnFe₂O₄悬浮于有机溶剂，得到悬浮液；

将所述悬浮液、造孔剂和水第一混合，去除所述有机溶剂，得到第一混合液；

将所述第一混合液、水、甲醇和乙酸乙酯第二混合，得到第二混合液；

将所述第二混合液、氢氧化铵溶液、四乙氧基硅烷和3-氨丙基三乙氧基硅烷第三混合，得到第三混合液；

对所述第三混合液进行离心，收集沉淀，洗涤所述沉淀后去除造孔剂，得到磁性介孔硅纳米粒子。

8.权利要求6或7所述的内质网靶向磁性囊泡在制备免疫佐剂中的应用。

9.一种疫苗，其特征在于，包括磁性介孔硅纳米粒子，以及包被在所述磁性介孔硅纳米粒子的孔道内的内质网靶向囊泡和抗原，所述内质网靶向囊泡由权利要求5所述制备方法制备得到。

10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述抗原包括病原菌抗原或肿瘤抗原。