[发明专利]臭灵丹提取物在抗产超广谱β-内酰胺酶耐药菌中的应用

说明书

本发明公开了臭灵丹提取物在抗产超广谱β‑内酰胺酶耐药菌中的应用。该臭灵丹提取物用甲醇、乙醇及脂溶性溶剂提取，再经萃取、层析获得。本发明所述的臭灵丹提取物通过微量肉汤二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)，实验数据显示该提取物对对产超广谱β‑内酰胺酶和非产超广谱β‑内酰胺酶大肠杆菌耐药菌具有一定的抗菌活性，具有开发成抗耐药菌药物的前景。

技术领域

本发明属于天然药物化学领域领域，尤其涉及一种臭灵丹提取物的制备及在抗菌方面的应用，尤其涉及在抗产超广谱β-内酰胺酶耐药菌方面的应用。

背景技术

近年来，随着抗生素在临床疾病治疗中长期应用和滥用，临床分离出的大肠杆菌多呈现多重耐药(multidrug resistant，MDR）现状。随着病原菌的进化，多种菌株产生耐药性，抗生素的剂量越用越大，效果却越来越差，甚至逐渐丧失疗效，大肠杆菌对头孢菌素类药物的耐药性在欧洲显著增加，且喹诺酮类和氨基糖苷类联用对大肠杆菌的治疗效果也显著下降。因此，为了解决耐药菌株引起的威胁，科学家们正在迫切探索新型抗生素和解决耐药性问题的新方法。

天然药物在我国药物化学中占有重要的地位。中药是医学研究的瑰宝，其中很多天然产物都具有很好的药理作用和生物学作用，对于治疗疾病有很好的效果，是现代中药研究中的一个热点，在新药研究和开发、中药现代化以及中药资源开发等方面具有广阔的应用前景。

臭灵丹(Laggera Pterodonta (DC.) Benth)为菊科六棱菊属药用植物，别名狮子草、臭叶子、六棱菊等，分布于云南、四川、西藏等地，主产于我国云南省，药源丰富。《云南中草药》、《昆明民间常用草药》、《滇南本草》等著作中都对云南民间使用的臭灵丹有大量的记载，具有治疗感冒、咽喉炎、支气管炎、疟疾等疾病的功效。目前已经从该属植物中鉴定的化合物主要为桉烷型倍半萜及黄酮醇类化合物。到现在为止臭灵丹已经研制成功用于咽喉肿痛、肺热咳嗽等抗炎治疗的药物，但目前对于耐药大肠杆菌还没有系统的、临床上的研究，至今尚无关于臭灵丹提取物对抗产超广谱β-内酰胺酶耐药菌中的应用的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供臭灵丹提取物在抗产超广谱β-内酰胺酶耐药菌中的应用，旨在解决所述背景技术中存在的问题。为实现所述目的，本发明采用的技术方案是：

本发明对臭灵丹的地上部分通过浓缩、提取分离获得活性提取物，并且对耐药大肠杆菌进行传代培养，通过微量肉汤二倍稀释法研究臭灵丹提取物对耐药菌的体外抑制作用，充分发挥我国天然植物资源的生物多样性，开发利用传统医学。对深入探讨活性组分的药理活性，进一步寻找具有生物活性的化合物，研制出疗效确切、副作用小、经济、有效和能广泛应用于临床的抗耐药菌的臭灵丹提取物的应用。

所述的臭灵丹提取物活性成分含以下化合物：臭灵丹酸、1β-羟基-臭灵丹酸、3β-羟基-臭灵丹酸、冬青酸、臭灵丹二醇、臭灵丹三醇甲、臭灵丹三醇乙、4-O-acetylcuauthemone 3-O-(2'-hydroxy-2'-methyl-3'-acetoxybutyrate)、3-(2',3'-diacetoxy-2'-methylbutyryl)-cuauhtemone。

所述的臭灵丹提取物的提取方法如下：将干燥臭灵丹地上部分进行充分粉碎，加入其重量8倍的甲醇冷浸或渗滤、加热回流、超声提取多次，收集溶剂得到初提物。

此初提物再经以下处理：加入4倍质量的水，静置后过滤除去不溶树脂物、叶绿素，减压浓缩得浓缩液，加入4倍质量无水乙醇，静置滤去不溶物，蒸干溶剂得臭灵丹提取物；或者，初提物上正相硅胶柱色谱，除去水溶性杂质，再用20%~95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂至干即可得臭灵丹提取物；或者，初提物溶液通过聚酰胺柱或葡聚糖凝胶柱，依次用水、95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂至干即可得臭灵丹提取物。

本发明的有益效果：