[发明专利]一种用于生产GDP-L-岩藻糖的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种用于生产GDP-L-岩藻糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌在本底菌株上表达了来源于柠檬酸杆菌(Citrobacter)的甘露糖-6-磷酸异构酶(manA)、磷酸甘露糖变位酶(manB)、甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶(manC)、GDP-甘露糖-4,6-脱氢酶(gmd)和GDP-岩藻糖合成酶(fcl)。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述本底菌株为大肠杆菌JM109、大肠杆菌BL21(DE3)、大肠杆菌Nissle、大肠杆菌K-12、枯草芽孢杆菌、谷氨酸棒状杆菌或柠檬酸杆菌中的一种；优选地，所述本底菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述柠檬酸杆菌为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、布氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)、或克氏柠檬酸杆菌(Citrobacter koseri)中的一种；优选地，所述柠檬酸杆菌为杨氏柠檬酸杆菌(Citrobacter youngae)ATCC 29935。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述来源于柠檬酸杆菌的甘露糖-6-磷酸异构酶(manA)的核苷酸序列与SEQ ID NO.1相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，优选为SEQ ID NO.1；

优选地，所述来源于柠檬酸杆菌的磷酸甘露糖变位酶基因(manB)的核苷酸序列与SEQID NO.2相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，优选为SEQ ID NO.2；

优选地，所述来源于柠檬酸杆菌的甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶基因(manC)的核苷酸序列与SEQ ID NO.3相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，优选为SEQ ID NO.3；

优选地，所述来源于柠檬酸杆菌的GDP-甘露糖-4,6-脱氢酶基因(gmd)的核苷酸序列与SEQ ID NO.4相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，优选为SEQ ID NO.4；

优选地，所述来源于柠檬酸杆菌的GDP-岩藻糖合成酶基因(fcl)的核苷酸序列与SEQIDNO.5相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，优选为SEQ ID NO.5。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌在本底菌株上敲除了UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(wcaJ)基因。

6.一种权利要求1-5中任一项所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将manA、manB、manC、gmd和fcl基因串联后插入到质粒的多克隆位点进行表达。

7.一种权利要求1-5中任一项所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将manA、manB、manC、gmd和fcl基因通过不同的组合整合到基因组特殊位点进行表达；优选地，所述不同的组合为通过随机组合串联。