[发明专利]一种猫嵌杯病毒抗原试纸条检测试剂盒

说明书

本发明提供一种猫嵌杯病毒抗原试纸条检测试剂盒，属于猫嵌杯病毒抗原检测技术领域。为了提供一种准确和有效的检测猫嵌杯病毒抗原的方法。一种检测猫嵌杯病毒的抗体对，所述抗体对是单克隆抗体A‑2株和A‑5株，所述单克隆抗体A‑2是由杂交瘤细胞A‑2株分泌获得的；所述单克隆抗体A‑5株是由杂交瘤细胞A‑5株分泌获得的。可用于特异性的鉴定动物体内是否有猫嵌杯病毒，以确定是否引发感染。

技术领域

本发明属于猫嵌杯病毒抗原检测技术领域，具体涉及一种猫嵌杯病毒抗原试纸条检测试剂盒。

背景技术

猫嵌杯病毒(Feline Calicivirus，FCV)是一种引起猫科动物口腔与呼吸道疾病的重要病原。FCV感染动物后临床症状主要表现为鼻炎、结膜炎、气管炎、肺炎的口腔上皮细胞的水疱和溃疡。该病也被称为猫传染性鼻结膜炎。FCV常常会与细菌、衣原体、支原体、寄生虫以及其他猫科动物上呼吸道病毒发生混合感染导致死亡率增加。FCV主要通过污染物在自然界传播，在猫之间可直接接触传播，病毒粒子也可通过人手触摸间接传播给易感猫。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种准确和有效的检测猫嵌杯病毒抗原的方法。

本发明提供一种杂交瘤细胞对，其特征在于，所述杂交瘤细胞对包括第一杂交瘤细胞株A-2株和第二杂交瘤细胞株A-5株。

本发明提供上述杂交瘤细胞对在检测猫嵌杯病毒抗原中的应用。

本发明提供一种检测猫嵌杯病毒的抗体对，所述抗体对是单克隆抗体A-2株和A-5株，所述单克隆抗体A-2是由杂交瘤细胞A-2株分泌获得的；所述单克隆抗体A-5株是由杂交瘤细胞A-5株分泌获得的。

本发明提供上述抗体对在检测猫嵌杯病毒抗原中的应用。

本发明提供一种检测猫嵌杯病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的抗体对。

进一步地限定，还包括PVC底板、金标垫、样品垫和吸水垫。

本发明提供上述的试剂盒的制备方法，其特征在于，以PVC背板为支撑物，在其上分别贴有样品垫、金标垫、硝酸纤维膜、吸水垫，其中金标垫采用聚酯膜，经含有1％BSA和1％吐温-20的PBS处理后，将制备好的胶体金标记单克隆抗体A-2金标垫部分，完毕，37℃烘干2h，硝酸纤维膜上包被有两条线：分别为质控线和检测线，其中检测线包被物为单克隆抗体A-5株浓度为1.6mg/mL，质控线包被物为纯化的兔抗鼠抗体浓度为2.1mg/mL，然后用Biodot划膜仪喷涂于硝酸纤维膜上，组装好后大板用切条机切成7-8mm的裸条备用。

进一步地限定，所述胶体金标记单克隆抗体A-2第一抗体混合物的终浓度为10μg/mL。

进一步地限定，所述胶体金的制备方法如下：

(1)1％的氯化金水溶液1mL，加入99mL超纯水，配置成0.01％的HAuCl4溶液，加热至沸腾；

(2)加入1.5mL 1％柠檬酸三钠水溶液，继续搅拌加热沸腾2～5min，金黄色的氯金酸水溶液在2min内颜色发生迅速变化，由灰色变成黑色最后变成紫红色，继续煮沸20min得到稳定的胶体金溶液。

进一步地限定，所述抗体对与标记胶体金混合的方法如下：

(1)用0.2mol/L K2CO3溶液调节胶体金溶液至pH8.0，加入单克隆抗体A-2，混合物的终浓度为10μg/mL；

(2)然后将抗体对的溶液10000rpm 4℃离心15min，弃上清，用复溶液溶解浓缩沉淀，复溶液浓缩比例为125μL/mL；

(3)将浓缩后的胶体金复合物喷涂于胶体金垫内，喷涂量为15μL/cm。