[发明专利]一种同步检测22种手足口病毒的检测引物探针组合及基因芯片

说明书

本发明公开了一种同步检测22种手足口病毒的检测引物探针组合及基因芯片，涉及病毒检测技术领域。22种手足口病毒包括13种柯萨奇病毒、1种肠道病毒和8种埃可病毒，检测引物组合的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～20所示。本发明提供的引物组合及探针组合具有检测手足口病的病原体的类型多(达22种)，范围广，准确度高的优势。利用设计的引物和探针制备的基因芯片和基因检测试剂盒仅通过一次试验就能同时检测22种手足口病毒。本发明提供的试剂盒不仅特异性好、灵敏度高，而且检测时间短、成本低、操作方便，对开展手足口病毒的临床筛查和辅助诊断具有重大的意义。可以在社区手足口病毒检测和院内病原体感染的场景中使用。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种同步检测22种手足口病毒的检测引物探针组合及基因芯片。

背景技术

手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)由肠道病毒感染而引起，以发热，咽喉痛，全身不适，手、足、口腔等部位皮疹或疱疹为主要特征的常见传染病，虽然大多数手足口病患者症状轻微，并且具有自限性，但仍有相当一部分患者有致死性心肺功能疾病和神经系统并发症，个别重症患者病情进展迅速，甚至可导致死亡。

手足口病致病病原体传染源为患者或隐性感染者，主要的传播途径为粪-口传播，也可经接触患者的疱疹液传播，接触病人和携带者的粪便、唾液和疱疹液污染的日常生活用品均可传播此病原体，近年来的报道显示，该病原体也可垂直传播，导致新生儿重症感染。人对肠道病毒普遍易感，不同年龄段均可感染发病，以5岁以下儿童为主，尤以3岁以下儿童发病率最高，该病流行无明显的地区性，全年均可发生，一般5-7月为发病高峰。该病的潜伏期一般为2-10天，平均潜伏期为3-5天，感染者发病前的数天即可从其咽拭子样本和粪便样本中检出病毒，病程为7天左右，咽部排毒可持续在发病后1-2周，而粪便排毒可持续至发病后3-5周。

引起手足口病的肠道病毒包括柯萨奇病毒A组的2、4、5、6、7、9、10、16型等，B组的1、2、3、4、5型等，肠道病毒71型及埃可病毒等，其中以EV71和CA16型较为常见。

目前，手足口病毒感染的特异性诊断方法有三种，即病毒分离鉴定、血清学检测技术以及分子生物学技术。病毒的分离培养和血清学方法繁杂费时，无法满足大量样本的快速诊断；而分子生物学技术主要对病毒核酸进行检测，主要包括胶体金、酶联免疫以及荧光PCR产品，其中以荧光PCR法居多，但是该检测方法具有检测靶点少，灵敏度较低，操作繁琐，检测耗时，检测仪器费用昂贵等缺陷。因此，有必要建立一种高通量、高效率、多靶点的检测方法，以实现临床快速检测或大规模人群筛查。

杂交分析检测技术由于其特异性高而被广为推崇，是高密度基因芯片之核心分析方法，能在同一芯片上同时分析千万个不同的基因片段，大大加速了研究的速度。杂交技术和PCR扩增技术结合，具有技术操作简单、自动化程度高、序列数量大、检测效率高、应用范围广、成本相对低的特点。

杂交法能提升核酸分析的特异性，但是大多数杂交方法耗时耗力，无法达到临床快速检测的要求。将灵敏性高的PCR检测技术配合特异性极高的反斑点杂交技术以一种简单、快速且省钱的方式结合起来，利用导流杂交技术可大大提高杂交的效率，且操作方便，从而避免了传统杂交方法冗长的操作过程。目前，市场上还未有获证的多靶点手足口病毒检测产品，因此，开展该项目的检测用于人群大规模筛查具有很大的市场潜力。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同步检测22种手足口病毒的检测引物探针组合及基因芯片以满足简单、快速检测和大规模人群筛查的需求。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种同步检测22种手足口病毒的检测引物组合，22种手足口病毒包括13种柯萨奇病毒、1种肠道病毒和8种埃可病毒；