[发明专利]一种铁皮石斛组培培养方法及其培养基配方

说明书

本发明提供一种铁皮石斛组培培养方法及其培养基配方，涉及铁皮石斛组织培养技术领域。该铁皮石斛组培培养方法，包括以下方法步骤：S1、选择性状健康的铁皮石斛种苗的茎，去除多余的叶片并将其切成0.5cm的茎段，作为铁皮石斛组织培养的外植体，经过消毒处理后备用；S2、将消毒后的外植体接种至预培养培养基中进行培养，培养温度控制在23℃，光照时间12h/天，光照强度保持在2000LUX；S3、将经过S2步骤培养后的外植体接种于诱导培养基中进行诱导培养，之后得到原球茎。通过在培养基中添加茶多酚、柠檬酸、Ve、活性炭等成分，在铁皮石斛茎段组织的培养中能够有效降低褐化率、促进生根，提高诱导率，并且显著提高种苗质量和成活率，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及铁皮石斛组织培养技术领域，具体为一种铁皮石斛组培培养方法及其培养基配方。

背景技术

铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，因表皮呈铁绿色而得名，是我国传统的名贵中药材，具有养阴生津，补肾益力，护肝利胆，温胃明目，降低血糖，滋养肌肤，延年益寿等功效，是《中华人民共和国药典》中被收载的五种石斛属植物之一，由于石斛自然繁殖力低，加上长期采挖，使野生铁皮石斛资源日益枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。

为了更好地保护和利用铁皮石斛资源，铁皮石斛的组织培养技术是其繁殖的一种重要手段，但是一般组织培养过程中如茎段诱导存在褐化率较高、诱导率不高、生根困难、资源消耗量大而且浪费严重等问题，因此，本发明旨在提供一种铁皮石斛组培培养方法及其培养基配方来解决上述技术问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种铁皮石斛组培培养方法及其培养基配方，解决了当前对于铁皮石斛的组织培养技术中，茎段诱导存在褐化率较高、诱导率不高、生根困难、资源消耗量大而且浪费严重的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种铁皮石斛组培培养方法，包括以下方法步骤：

S1、材料预备：选择性状健康的铁皮石斛种苗的茎，去除多余的叶片并将其切成0.5cm的茎段，作为铁皮石斛组织培养的外植体，经过消毒处理后备用；

S2、预培养：将消毒后的外植体接种至预培养培养基中进行培养，培养温度控制在23℃，光照时间12h/天，光照强度保持在2000LUX；

S3、诱导培养：将经过S2步骤培养后的外植体接种于诱导培养基中进行诱导培养，之后得到原球茎；

S4、增殖培养：将所述的原球茎置于增殖培养基中进行增殖培养，得到丛生芽苗；

S5、生根培养：将所述的丛生芽苗置于生根培养基中进行生根培养，最终得到铁皮石斛的幼苗。

优选的，所述S2步骤中，所述外植体在预培养培养基中进行培养时，空气相对湿度保持在80～85％。

优选的，所述预培养培养基以MS培养基为基础，还包括以下浓度的组分：茶多酚8-20mg/L、柠檬酸20-80mg/L、Ve10-30mg/L、萘乙酸0.2-0.6mg/L、琼脂8-14g/L、蔗糖6-12g/L。

优选的，所述诱导培养基以MS培养基为基础，还包括以下浓度的组分：茶多酚8-20mg/L、柠檬酸20-80mg/L、Ve10-30mg/L、萘乙酸0.2-0.6mg/L、6-苄氨基嘌呤0.2-0.7mg/L、琼脂8-14g/L、蔗糖6-12g/L。

优选的，所述增殖培养基以MS培养基为基础，还包括以下浓度的组分：茶多酚8-20mg/L、柠檬酸20-80mg/L、Ve10-30mg/L、萘乙酸0.2-0.6mg/L、琼脂8-14g/L、蔗糖6-12g/L。