[发明专利]一种口蹄疫146S抗原的分型定量方法

权利要求书

1.一种口蹄疫146S抗原的分型定量方法，其包括以下步骤：

S1：提供N份等量的含有多种口蹄疫血清型146S抗原的待测样品，其中N为口蹄疫血清型的种类数，所述多种口蹄疫血清型为已知的血清型，所述多种口蹄疫血清型146S抗原分别命名为FMD1、FMD2、…、FMDN；

S2：在第1份待测样品中加入分别能中和除FMD1之外的其他N-1种口蹄疫血清型146S抗原的口蹄疫阳性血清，在第2份待测样品中加入分别能中和除FMD2之外的其他N-1种口蹄疫血清型146S抗原的口蹄疫阳性血清，…，在第N份待测样品中加入分别能中和除FMDN之外的其他N-1种口蹄疫血清型146S抗原的口蹄疫阳性血清，共得到N份混合样品；

S3：孵育步骤S2所得N份混合样品，使得各混合样品中口蹄疫阳性血清与对应的口蹄疫血清型146S抗原发生中和反应，得到N份中和处理样品；和

S4：分别检测步骤S3所得N份中和处理样品中的146S抗原含量，即对应为FMD1、FMD2、…、FMDN的含量。

2.根据权利要求1所述的分型定量方法，步骤S1中，所述多种口蹄疫血清型为选自口蹄疫O型、A型、亚洲1型、C型、南非1型、南非2型、和南非3型中的2种或2种以上；可选为口蹄疫O型和A型；

进一步可选地，所述口蹄疫O型包括以下8个拓扑型：中国型(CATHAY)、中东-南亚型(ME-SA)、东南亚型(SEA)、欧洲-南美型(EURO-SA)、印度尼西亚-1型(ISA-1)、印度尼西亚-2型(ISA-2)、东非型(EA)和西非型(WA)；所述口蹄疫A型包括以下3个拓扑型：亚洲型(ASIA)、欧洲-南美型(EURO-SA)和非洲型(AFRICA)。

3.根据权利要求1或2所述的分型定量方法，步骤S2中，所述口蹄疫阳性血清为由口蹄疫病毒毒株感染试验动物，或由口蹄疫疫苗免疫试验动物产生。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的分型定量方法，步骤S2中，所述口蹄疫阳性血清为由同一血清型的多种拓扑型口蹄疫病毒毒株感染试验动物，或由同一血清型的多种拓扑型口蹄疫病毒抗原配制的疫苗免疫试验动物产生。

5.根据权利要求3或4所述的分型定量方法，其中所述试验动物包括猪、牛、兔。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的分型定量方法，步骤S2中，针对每一种口蹄疫血清型146S抗原的口蹄疫阳性血清的加入量为使得所述口蹄疫阳性血清能中和90％以上，优选95％以上，进一步优选100％的相对应的口蹄疫血清型146S抗原。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的分型定量方法，步骤S2中，当所述待测样品中每一种口蹄疫血清型146S抗原的含量为200μg/ml以下时，所述口蹄疫阳性血清的加入量为使得所述口蹄疫阳性血清的终浓度≥1：2⁶。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的分型定量方法，步骤S3中，所述孵育的条件为：37±1℃条件下孵育30-60min。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的分型定量方法，步骤S4中，所述检测的方法包括蔗糖密度梯度离心法。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的分型定量方法，其中所述待测样品包括口蹄疫多价疫苗的破乳水相、口蹄疫多价疫苗生产用病毒液、口蹄疫多价疫苗中间品。