[发明专利]一种用于检测CYP2C19基因多态性的引物及荧光探针

说明书

本发明公开了一种用于检测CYP2C19基因多态性的引物及荧光探针。所述引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.6所示的序列；所述荧光探针的核酸序列包括SEQ ID NO.7‑SEQ ID NO.9所示的序列。本发明创造性设计了用于检测CYP2C19基因多态性的引物及荧光探针，能够快速、简便、准确、高效、实用、经济地在一管中检测CYP2C19*2/*3/*17的3个基因型别，通过信标熔解曲线法对病毒的各型别进行有效区分，能够满足临床检验实际工作中相关位点检测的要求。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测CYP2C19基因多态性的引物及荧光探针。

背景技术

2021年，全国药品不良反应监测网络共收到《药品不良反应/事件报告表》196.2万份，据世界卫生组织WHO预测，2025年我国慢性病药物费用将超过2500亿美元，其中约50％属于无效支出，2021年6月23日，国家心血管病中心发布了《中国心血管健康与疾病报告2021》报告显示，我国心血管病的发病率与致死率仍高居榜首。2019年农村、城市心血管病分别占死因的46.74％和44.26％，每5例死亡中就有2例死于心血管病。

氯吡格雷是目前使用最广泛的抗血小板药，用于急性冠脉综合征、冠脉支架术和冠心病的治疗。氯吡格雷是一种前提药物，经肝脏细胞色素P450代谢为有活性产物才能发挥其药效。CYP2C19是CYP450酶第二亚家族中的重要成员，是人体重要的药物代谢酶之一。根据药物代谢的能力不同，临床上通常分为4种表型：超快代谢者(UM)、快代谢者(EM)、中间代谢者(IM)和慢代谢者(PM)。CYP2C19具有很多SNP(单核苷酸多态性)位点，最常见的就是CYP2C19*2(rs4244285，c.681GA)和CYP2C19*3(rs4986893，c.636GA)的基因多态性。近几年随着科学研究的深入，发现CYP2C19*17(rs12248560,c.-806CT)在人类的药物代谢方面也起着非常重要的作用。去年的CPIC指南中更新了CYP2C19基因型的代谢类型划分，将CYP2C19*17/CYP2C19*17基因型划分为超快代谢群(UM)，CYP2C19*1/CYP2C19*17划分为快代谢群(RM)。通过对CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测，可以判断患者的药物代谢类型，评估个体的用药效果，给出合适的剂量或治疗策略，提高氯吡格雷的疗效，降低氯吡格雷抵抗的风险。在氯吡格雷用药前，进行CYP2C19基因型检测对临床用药有指导意义。

截止到目前，国产医疗器械注册产品关于CYP2C19基因多态性检测试剂盒，国家药品监督管理局共批准注册产品23个。检测方法涵盖：DNA微阵列芯片法、基因芯片法、PCR-金磁微粒层析法、PCR毛细电泳片段分析法、焦磷酸测序法、PCR-荧光探针法等。然而，这些方法对检测设备有一定要求，操作繁琐，检测时间长，不能进行快速检测。

CN114736955A公开了一种恒温扩增结合熔解曲线法检测药物基因组多态性的引物和分子信标探针及其试剂盒，所述试剂盒包括引物、分子信标探针恒温扩增冻干反应管、醋酸镁溶液和复溶液，该方法检测通量高，准确度和灵敏度高，但此方法需要进行恒温扩增冻干反应，成本较高，操作复杂。

CN114807337A公开了引物探针组合以及试剂盒，所述引物和探针包括CYP2C19*2引物及探针、CYP2C19*3引物及探针、CYP2C19*17引物及探针、内控引物及探针，所述引物特异性强、灵敏度高，可准确检出低值0.1ng/μL的基因组DNA，但此方法由于空间距离导致荧光基团和淬灭荧光基团之间无法达到零距离接触，从而无法实现零背景的荧光。

综上所述，目前检测CYP2C19基因多态性的方法存在操作复杂、检测周期长、易污染、易出现假阳性或假阴性、检测成本较高、通量小等问题。如何提供一种快速低成本且灵敏度高的CYP2C19基因多态性检测方法，已成为目前生物技术领域亟待解决的问题之一。

发明内容