[发明专利]一种地龙肽及其制备方法

权利要求书

1.一种地龙肽，其特征在于，包括：所述地龙肽为分子量在6000道尔顿以下的天然多肽与水解多肽。

2.一种地龙肽制备方法，其特征在于，

(1)原料投放：取地龙清洗干净，并将其干燥，使用称重装置对其进行称重，接着将其加入到破碎机中，向破碎机中加入体积分数为60％-70％的酒精，其加入酒精的体积与地龙质量数值比值为4L/1kg，酒精逐渐加入，加入之后启动破碎机将其进行破碎混合；

(2)原料闪提：将酒精和冻蚯蚓混匀之后，将其通过输送管道送入到闪式提取器，通过闪式提取器进行提取，时间为1分钟；

(3)混合液离心：闪提结束后，通过低速离心机进行离心，将闪提后的混合液中的沉淀与上清分离，离心的条件是5000r/min，时间为15min，得到混合液；

(4)上清液过滤：对闪提后的上清液进行通过分离膜进行分离，将上清液中的蛋白质与天然多肽通过分离膜进行分离，得到含有蛋白质的溶液a与含有天然多肽的溶液b；

(5)溶液b真空干燥：分离完成后，将溶液b放入真空干燥机，温度设定为50摄氏度，待水分完全被干燥后将固体物取出，得到天热多肽。

(6)蛋白质闪提：将溶液a中加入蒸馏水进行混合，其混合比值为1:2，并通过闪式提取器进行闪提。闪提的时间为1min；

(7)超声提取：将闪提后的溶液放入恒温超声提取机进行超声提取，温度设置在38℃，超声提取时间设置为30min，超声功率为800W；

(8)低温离心：将超声提取后的悬浊液进行高速低温离心；离心的条件是温度为-4℃，转速为11000r/min，时间为50min；

(9)酶解：低温离心完成后，取上清液，加入蒸馏水，其体积为上清液的5倍，调节pH至5.5，加入地龙质量2％的蛋白酶，在50摄氏度下磁力搅拌2小时；

(10)酶解液分离：磁力搅拌时间完成后，立即用分离膜将酶解液进行分离，将蛋白酶以及水解多肽进行分离；

(11)酶解液离心：将煮沸过后的酶解液冷却后送入到离心容器，使用低速离心机离心，离心的条件是5000r/min，时间为15min，得到其上清液为溶液c；

(12)酶解液真空干燥：离心完成后，取溶液c，放入真空干燥机，温度设定为50摄氏度，待水分完全被干燥后将固体物取出。

3.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：步骤(1)中地龙清洗干净的方法是将新鲜的蚯蚓外表面冲洗，置于水中48小时得到。

4.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(3)之后的沉淀加入蒸馏水，其蒸馏水体积与沉淀物质量比4ml：1g，然后用闪式提取器进行闪提，闪提的时间为1min，并重复步骤(3)以及之后操作。

5.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(4)与步骤(10)中的分离膜为超滤膜或者选用10000道顿尔的纳滤膜进行分离。

6.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(6)超声提取后，可将悬浊液装瓶，放入低温装置进行冷冻，冷冻时间为12h，冷冻结束后在通过常温进行融化，接着进行步骤(7)以及后续作业。

7.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(8)蛋白酶选用木瓜蛋白酶，并在搅拌过程中要不断地调节pH，控制pH在5.5-6之间。

8.根据权利要求7所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(8)控制pH在5.5-6之间的方法为用0.1～2.0mol/L的盐酸(HCl)溶液将pH调至3～5.5。

9.根据权利要求2所述的一种地龙肽制备方法，其特征在于：所述步骤(4)溶液b与步骤(11)得到的溶液b与溶液c可以通过不同分子量的纳滤膜进行二次过滤，得到相应大小区间的地龙肽。