[发明专利]一种制备伊特卡肽的方法

说明书

本发明公开了一种制备伊特卡肽的方法，属于多肽药物制备技术领域，具体涉及通过将磁性二氧化硅微球或修饰改性后的磁性二氧化硅微球与D301大孔树脂复配，用以吸附除去伊特卡肽粗液中的杂质，并经后续纯化处理制备得到高纯度的伊特卡肽，修饰改性后的磁性二氧化硅微球上存在甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团，采用了该复合填料树脂分离柱对杂质的吸附效果好。本发明对伊特卡肽具有好的纯化分离效果。

技术领域

本发明属于多肽药物制备技术领域，具体涉及一种制备伊特卡肽的方法。

背景技术

伊特卡肽（etelcalcetide，曾用名维拉卡肽velcalcetide）是用于治疗慢性肾病透析患者继发性甲状旁腺机能亢进的药物，它是一种新型拟钙剂(calcimimeticagent)，结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，抑制甲状旁腺激素的分泌，从而实现甲状旁腺激素水平的降低。

伊特卡肽是含有S-S键的8个氨基酸多肽，化学名为N-乙酰基-D半胱氨酰基-S-（L-半胱氨酸二硫键取代）-D-丙氨酰基-D-精氨酰基-D-精氨酰基-D-丙氨酰基-D-精氨酰胺，临床应用盐型为带有4-5个盐酸分子的盐酸盐，为高亲水的水溶性多肽。

二硫键的形成是伊特卡肽合成制备工艺的关键步骤，液相氧化合成二硫键相比于其它工艺，具有简单、经济的优势，并且能通过HPLC监测氧化产物和程度，工艺过程可控性强，是比较具有工业化生产应用前景的工艺。但由于伊特卡肽属于高亲水多肽，在常规反相C18纯化填料上的保留很弱，因此，后续的纯化是液相氧化法制备伊特卡肽的难点，主要表现在以下两个方面：（1）伊特卡肽属于高亲水多肽，其盐酸盐、醋酸盐、磷酸盐、硫酸盐等非三氟乙酸盐的盐型，在C18填料上基本没有保留，纯水相或低浓度有机相洗脱1-2柱体积即可出峰，其三氟乙酸盐，纯水相或低浓度有机相洗脱3-4个柱体积即可出峰，主成分和杂质的分离效果差，尤其是主峰前杂；（2）液相氧化要减小二硫键的错配反应就需要控制反应溶液的浓度，因此，液相氧化得到的产品一般为肽含量较低的粗肽溶液，对粗肽溶液进行纯化时，样品上样量很大，主成分在上样过程中由于其保留性能差，有洗脱的风险，导致制备失败和纯化效果降低。

因此，开发一种纯化过程可操作性强、杂质分离度好、纯化效果稳定的纯化方法，极具应用前景和经济实用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纯化制备效果好的制备伊特卡肽的方法。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种制备伊特卡肽的方法，包括：将伊特卡粗肽溶液通过树脂分离柱吸附分离得到伊特卡肽溶液，然后采用离子交换色谱对伊特卡肽溶液进行换盐纯化，制备得到伊特卡肽；树脂分离柱中的填料为大孔树脂和磁性二氧化硅微球或修饰改性的磁性二氧化硅微球；修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团或对乙烯基苯磺酸基团或对乙烯基苄胺基团。

优选地，树脂分离柱中磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%；或，修饰改性的磁性二氧化硅微球的使用量为大孔树脂的5-25wt%。

优选地，阳离子交换色谱的洗脱流动相为含有盐酸根或硫酸根或醋酸根的盐溶液。

优选地，纳滤中使用的冲洗液为盐酸溶液或硫酸溶液或醋酸溶液。

更优选地，盐酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的盐酸；或，硫酸溶液中含有体积分数为0.001%-0.01%的硫酸；或，醋酸溶液中含有体积分数为0.1%-5%的醋酸。

优选地，修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷基团，由甲基丙烯酰氧甲基三甲氧基硅烷与磁性二氧化硅微球反应生成。

优选地，修饰改性的磁性二氧化硅微球上含有对乙烯基苯磺酸基团，由对乙烯基苯磺酸、丙烯酸甲酯、交联剂与磁性二氧化硅微球反应生成。