[发明专利]用于检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的试剂及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的试剂，其特征在于，包括：DNA提取液、甲基化试剂、PCR特异性引物、特异性探针和内参基因；

所述DNA提取液包括：SDS、蛋白酶K、有机溶剂酚、氯仿、无水乙醇；

所述甲基化试剂包括：无菌双蒸水、0.2M NaOH、10mM对苯二酚、3M亚硫酸氢钠、石蜡油、2％-10％二甲基亚砜；

所述内参基因为β-actin。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的试剂，其特征在于，所述二甲基亚砜浓度为4％。

3.一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，包括步骤：

提取待测样品的DNA，所述待测样品为人的血清或者尿液；

对所述待测样品的DNA进行甲基化，得到甲基化DNA；

以内参基因作为标准，对所述甲基化DNA进行荧光定量PCR检测。

4.根据权利要求3所述的一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，所述甲基化的具体过程为：

将待测样品的DNA用无菌双蒸水稀释至50μl；

加入0.2M NaOH，42℃水浴，30 min；

依次加入30μl 10mM对苯二酚、520μl 3M亚硫酸氢钠，混匀；

加入200μl石蜡油；

50℃避光水浴16h。

5.根据权利要求3所述的一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR检测具体过程为：

加入特异性引物和特异性探针；

配置PCR体系；

进行PCR程序，得到PCR产物，4℃保存。

6.根据权利要求3所述的一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，所述PCR体系包括：7.5μl PCR Master Mix、0.4μl P1、0.4μl P2、4.7μl无菌双蒸水、2μl甲基化DNA。

7.根据权利要求5所述的一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，所述PCR程序具体包括：

95°C预变性3 min，1个循环；

95°C变性15 s，60°C退火20 s，72°C延伸1 min，40个循环；

72°C终延伸5 min。

8.根据权利要求3所述的一种检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的方法，其特征在于，所述提取待测样品中的DNA具体过程为：

将待测样品离心，300g，2min；

取离心后待测样品的上清液200μl，放入第一EP管中，在所述第一EP管加入600μl SDS和12μl蛋白酶K，水浴56℃，2h，水浴期间每10min混匀一次；

取出所述第一EP管，充分震荡，4℃，离心，300g，5min；

吸取所述第一EP管上清液200μl，放入第二EP管中，向所述第二EP管加入有机溶剂酚与氯仿，离心，5min；

吸取所述第二EP管上清液200μl，放入第三EP管中，向所述第三EP管加入1ml无水乙醇或异丙醇，离心4000g，5min，弃上清，得到待测样品的DNA。

9.一种用于检测人血清、尿液ADAMTS18基因甲基化的试剂盒，包括权力要求1中所述的试剂，其特征在于，还包括：

盒体（1）；所述盒体（1）底部设有载物盘（16），所述载物盘（16）上表面包括用于定位卡装试管（15）的多个凹部；

平整板（6），所述平整板（6）可动地安装在所述盒体（1）内；

盖体（14），所述盖体（14）位于所述载物盘（16）的右端并竖直延伸；

传动部件，所述传动部件包括多个转轴（5）和横轴（4），所述横轴（4）一段与所述盒体（1）的内侧壁铰接，每个转轴（5）上端均与所述盒体（1）的内顶壁铰接，所述横轴（4）下端均与横轴（4）枢接，在试剂盒关闭状态时，所述横轴（4）平行于所述盒体（1）的内顶壁；

卡紧组件，所述卡紧组件位于所述盖体（14）的外侧并在试剂盒关闭状态时卡紧所述盒体（1）的顶部。