[发明专利]动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法及应用

说明书

本发明公开了动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法，属于食品安全领域，称取2.00g样品于50mL离心管中加入8mL 0.2moL/L的乙酸钠缓冲液；加入100ng/mL混合内标溶液100μL；加入50μLβ盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀，37℃酶解过夜。本发明所述的动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法及应用，使用浓高氯酸沉淀蛋白，与稀高氯酸相比，节约了使用量，减少了液体总体积，方便后续处理；PH调节过程引入了CO3supgt;2‑/supgt;‑HCO3supgt;‑/supgt;缓冲体系(PKa＝10.2),按照上述PH调节过程加入相关试剂后，每个样品PH就落在范围内，确保了PH的一致性和PH调节的高效性。

技术领域

本发明涉及食品安全领域，特别涉及动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法及应用领域。

背景技术

当前，动物源性食品中β受体激动剂的检测国家标准方法前处理方法步骤一般为：样品酶解过夜，然后加入强酸沉淀蛋白，再用碱调节PH到10左右，然后用混合有机溶剂反萃取、蒸干、复溶后过MCX小柱净化、浓缩、定容以及上机测试。在实践过程中，发现现行国家标准方法存在2个缺点：1、PH调节过程通过逐步添加酸碱来实现，结果不好把控，容易出现调节过头的现象，需要反复加酸碱，影响检测效率和各个样品间PH值的均一性问题。2、反萃取过程使用的混合有机溶剂(异丙醇-乙酸乙酯(3：2)或乙酯乙酯-叔丁基甲基醚(3：2))，对后续处理产生产生影响或可能产生实验室安全问题。如提取液异丙醇-乙酸乙酯(3：2)，由于异丙醇极性非常大，萃取过程中容易带入一定的水分，导致后面蒸发浓缩时蒸不干，影响后续处理。提取液乙酯乙酯-叔丁基甲基醚(3：2)使用危险性溶剂叔丁基甲基醚容易产生实验室安全问题，另外乙酯乙酯比例过高，导致引入的脂溶性杂质过多，影响后续处理效果。经过长时间的摸索和验证，鉴于此，我们提出一种动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法及应用。

发明内容

本发明的主要目的在于提供动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法及应用，主要在于解决动物源性食品中β受体激动剂检测国标方法中PH调节不确定性，消除反萃取混合有机溶剂的后续不利影响，形成一种简单、高效的前处理方法。

为解决背景技术中提出问题，本发明采取的技术方案为：一种动物源性食品中β受体激动剂高效检测前处理方法：

称取2.00g样品于50mL离心管中加入8mL 0.2moL/L的乙酸钠缓冲液(PH＝5.2)；

加入100ng/mL混合内标溶液100μL(加标样品可根据需要加入适量的标准溶液)；

加入50μLβ盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀，37℃酶解过夜；

取出酶解好的样品，加入350μL浓高氯酸沉淀蛋白，混匀，离心，上清液倒入另一支50mL离心管；

加入10moL/L氢氧化钠溶液350μL，轻轻混匀；

然后加入1moL/L碳酸氢钠溶液5mL；

再加入乙腈-乙酸乙酯(2+1)混合提取液20mL,5g氯化钠，混匀萃取30s，离心，取10mL上清液蒸干；

用5mL 0.1moL/L盐酸溶液复溶，过MCX小柱净化，净化液浓缩蒸干，定容到1mL，上机测试。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1、使用浓高氯酸沉淀蛋白，与稀高氯酸相比，节约了使用量，减少了液体总体积，方便后续处理。

2、PH调节过程引入了CO3^2--HCO3^-缓冲体系(PKa＝10.2),按照上述PH调节过程加入相关试剂后，每个样品PH就落在范围内，确保了PH的一致性和PH调节的高效性。