[发明专利]协氧蛋白FHb及其重组菌X33-pPICZαA-102C300C-FHb1和应用

说明书

本发明涉及一种协氧蛋白FHb及其重组菌X33‑pPICZαA‑102C300C‑FHb1和应用，属于基因工程技术领域，协氧蛋白FHb的基因的核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。本发明还提供所述协氧蛋白FHb的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。本发明还提供包括褐藻胶裂解酶基因和所述协氧蛋白FHb的基因的重组表达载体及重组菌X33‑pPICZαA‑102C300C‑FHb1，所述重组工程菌提高了菌体在发酵后期低氧环境中对氧气的利用率，最终提高了褐藻胶裂解酶的产量。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体地涉及一种协氧蛋白FHb及其重组菌X33-pPICZαA-102C300C-FHb1和应用。

背景技术

毕赤酵母是继大肠杆菌之后最常用的蛋白质表达系统，目前它广泛用于实验室规模的蛋白质制备、表征和结构分析。在生物药物领域，可通过毕赤酵母表达生产各种蛋白质，例如胰岛素、乙型肝炎表面抗原、人血清白蛋白和表皮生长因子等。与大肠杆菌和枯草芽孢表达系统相比具有许多优点，例如可以实现有效的分泌表达，减少后期分离和纯化目标蛋白所需的工作量，外源基因整合到基因组中可稳定表达以及简便廉价的高密度生物质积累。

毕赤酵母X33属于野生型菌株，可以快速利用甲醇，将重组载体整合到菌株基因组上，结合载体上的醇氧化酶启动子(AOX),控制外源蛋白在宿主中的表达。当前，在发酵过程中，由于毕赤酵母为高好氧微生物,常常会因为设备供氧能力有限，限制了细胞密度和氧化降解甲醇的速率，从而限制其目标蛋白的表达量。

黄素血红蛋白(Flavohemoglobin,FHb)是一类存在于细菌、酵母等单细胞生物中的血红蛋白。它包含一个n端血红蛋白结构域和一个c端氧化还原酶结构域，它们具有NAD(P)H和FAD的潜在结合位点。FHb被认为在O₂感应、储存和传递中发挥作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种协氧蛋白FHb及其重组工程菌X33-pPICZαA-102C300C-FHb-1和应用。本发明通过克隆协氧蛋白-黄素血红蛋白基因FHb，构建了产褐藻胶裂解酶的高表达菌株，提高了菌体在发酵后期低氧环境中对氧气的利用率，最终提高了褐藻胶裂解酶的产量。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种协氧蛋白FHb的基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，所述协氧蛋白FHb的基因可用于提高毕赤酵母工程菌分泌褐藻胶裂解酶效率。

本发明还提供一种所述协氧蛋白FHb，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。

一种重组表达载体，所述载体含褐藻胶裂解酶基因和所述的协氧蛋白FHb的基因，所述褐藻胶裂解酶的核苷酸序列为SEQ ID N0.3所示。

一种重组菌X33-pPICZαA-102C300C-FHb1，所述重组菌X33-pPICZαA-102C300C-FHb1包括所述重组表达载体；具体为将所述的协氧蛋白FHb的基因连接到褐藻胶裂解酶基因的末端，形成串联表达盒。

本发明还提供所述协氧蛋白FHb的基因在提高褐藻胶裂解酶分泌表达中的应用，所述的褐藻胶裂解酶分泌表达为在真核表达系统中分泌表达；优选为在毕赤酵母中分泌表达。

进一步，所述的毕赤酵母菌优选为毕赤酵母X33。

协氧蛋白FHb的基因的核苷酸序列：

atgtccttgactccagaccagatcaagttgatcaaggccaccgttccagtcttgaaagagcacggtactactatcaccg

gtcacttctacgacttgctgctgaaagaaaacccatccttgaacggtatcttcaaccagaccaaccagaagaacggtca