[发明专利]一种先导编辑系统及基因编辑方法

权利要求书

1.一种先导编辑系统，包括具有核酸酶活性的先导编辑器、包含同源序列模板的pegRNA，其特征在于，还包括具有非同源末端修复抑制性的蛋白。

2.根据权利要求1所述先导编辑系统，其特征在于，所述非同源末端修复抑制性的蛋白为能够特异性靶向53BP1蛋白并抑制53BP1蛋白活性的蛋白。

3.根据权利要求2所述先导编辑系统，其特征在于，所述非同源末端修复抑制性的蛋白为泛素化变体G08或者泛素化变体G08具有I44A突变的突变体，其中泛素化变体G08的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求1所述先导编辑系统，其特征在于，所述具有核酸酶活性的先导编辑器包括融合表达的核酸酶活性的Cas9蛋白和逆转录酶蛋白。

5.根据权利要求4所述先导编辑系统，其特征在于，所述具有核酸酶活性的先导编辑器的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.根据权利要求1所述先导编辑系统，其特征在于，包含同源序列模板的pegRNA包括带有编辑信息的反转录模板，反转录模板中与基因编辑对象中基因组序列同源的序列长度为15～25bp。

7.一种先导编辑用的重组表达序列，其特征在于，用于表达权利要求1～6任一所述先导编辑系统，所述重组表达系统包括：

(1)用于表达具有核酸酶活性的先导编辑器的第一基因序列，

(2)用于表达具有非同源末端修复抑制性的蛋白的第二基因序列，

(3)用于表达包含同源序列模板的pegRNA的第三基因序列。

8.根据权利要求7所述先导编辑用的重组表达序列，其特征在于，第一基因序列和第二基因序列使用同一表达载体进行表达，并且，第一基因序列和第二基因序列之间通过自切割短肽编码基因序列连接，从而使具有核酸酶活性的先导编辑器与具有非同源末端修复抑制性的蛋白通过自切割短肽进行融合表达。

9.一种基因编辑方法，其特征在于，使用权利要求7所述重组表达序列，先根据基因编辑对象中待基因编辑的序列设计pegRNA，获得第三基因序列，将第一基因序列、第二基因序列和第三基因序列均导入基因编辑对象中进行基因编辑，获得基因编辑后的产物。

10.根据权利要求9所述基因编辑方法，其特征在于，所述基因编辑对象为真核细胞或原核细胞。