[发明专利]一种双靶点抑制剂及含有该抑制剂的培养液和应用

说明书

本发明公开了一种双靶点抑制剂HDACs/mTORInhibitor1及含有该抑制剂的培养液和应用。通过将该抑制剂添加至克隆胚胎基础培养液PZM‑3中，可高效激活克隆胚胎自噬的发生，有效清除母源mRNA和蛋白，同时提高组蛋白乙酰化水平，有利于转录因子与DNA特异性结合，从而激活胚胎基因组转录，以此来提高克隆胚胎的质量和发育效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种双靶点抑制剂及含有该抑制剂的培养液和应用。

背景技术

体细胞核移植(SCNT)技术在优良种畜快速扩繁、地方品种保护、基因编辑动物生产等方面具有巨大潜力，但目前低下的克隆效率影响其应用。近几年的研究表明，在体细胞核移植生产克隆胚胎的过程中，存在核质不同周期、母源mRNA和蛋白降解不完全、表观重编程不完全、体细胞带来的异源线粒体存在等问题，导致克隆胚胎发育失败，

自噬最初被认为是一种原始降解途径，是机体抵抗外界不良环境的一种反应，但后来证实参与了细胞、胚胎多种生物学功能，包括代谢调节、免疫系统调节、细胞更新等。研究表明，自噬活性与胚胎发育潜力有关，可以作为植入前胚胎质量的指标之一。在卵母细胞发生过程中，其积累了发育所必需的母体mRNA和蛋白质。在精卵结合后，母体mRNA和蛋白质在胚胎的二细胞阶段后迅速降解，由胚胎基因组编码的新合成的蛋白质开始被翻译，这个过程被称为卵母细胞到胚胎的转变。在原核阶段高水平的自噬诱导对于将卵母细胞胞质物质转换为合子物质，即产生母体蛋白质分解的氨基酸是重要的，分解的氨基酸可用于植入前发育过程中新的蛋白质合成。但是克隆胚胎中，自噬激活明显不足，导致克隆胚胎中母体mRNA和蛋白质的消除显著延迟，由此导致自噬抑制引起的发育障碍，导致克隆胚胎发育质量较差。

目前急需要一种物质可以来有效激活克隆胚胎的自噬，改善克隆胚胎发育质量，提高克隆效率。

发明内容

本发明的目的是提供可以有效激活克隆胚胎自噬的双靶点抑制剂及含有该双靶点抑制剂的培养液和应用，以改善克隆胚胎发育质量，提高克隆效率。

根据本发明的第一个方面，提供了一种双靶点抑制剂，该双靶点抑制剂为HDACs/mTOR Inhibitor 1，其化学式为C₂₈H₃₈N₈O₅，其结构式为：

由此，通过在克隆胚胎的培养液中添加该双靶点抑制剂，培养24h后，可以激活胚胎自噬的发生，有效清除母源mRNA和蛋白，同时提高组蛋白乙酰化水平，有利于转录因子与DNA特异性结合，从而激活胚胎基因组转录，进而改善克隆胚胎发育质量，提高克隆效率。

根据本发明的第二个方面，提供了一种双靶点抑制剂在克隆胚胎培养中的应用，该双靶点抑制剂为HDACs/mTOR Inhibitor 1。由此，通过在克隆胚胎的培养液中添加该双靶点抑制剂，培养24h后，可以激活胚胎自噬的发生，有效清除母源mRNA和蛋白，同时提高组蛋白乙酰化水平，有利于转录因子与DNA特异性结合，从而激活胚胎基因组转录，进而改善克隆胚胎发育质量，提高克隆效率。

在某些实施方式中，该应用是通过将所述双靶点抑制剂添加至克隆胚胎培养液中，来提高克隆胚胎发育质量。

在某些实施方式中，双靶点抑制剂的添加浓度为1nM-10μM。

在某些实施方式中，双靶点抑制剂的添加浓度为1μM。

根据本发明的第三个方面，提供了一种双靶点抑制剂提高克隆胚胎自噬水平上的应用。由此，可以高效地激活克隆胚胎自噬的发生，有效清除母源mRNA和蛋白，同时提高组蛋白乙酰化水平，有利于转录因子与DNA特异性结合，从而激活胚胎基因组转录，以此来提高克隆胚胎的质量和发育效率。