[发明专利]检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物，包括20对特异性引物，如SEQ ID NO.1～40所示。本发明还公开了包含该引物的试剂盒。本发明还公开了一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的检测方法：(1)取待检测样品，进行基因组DNA提取；(2)利用检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物或试剂盒进行PCR扩增；(3)对PCR产物进行纯化，制备文库；然后进行二代测序。本发明实现了对22种解热镇痛及呼吸系统类药物相关的20种多态性基因位点同时进行检测，具有灵敏度高、成本低、操作简单、检测通量高等特点，可以快速精准的对解热镇痛及呼吸系统类药物基因多态性进行检测。

技术领域

本发明涉及一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物及试剂盒，以及检测方法，属于基因检测技术领域。

背景技术

发热及呼吸系统疾病是常见的疾病，患者应及时就医和用药。但是由于个体差异，同样的药物对不同患者的疗效不同，甚至会发生严重的不良反应，因此需要结合个体特质选择合适的药物及适合的剂量。

个体化用药指导依赖于相关药物基因的检测，即通过检测与药物代谢、疗效和毒性相关的基因多态性位点，了解个体的药物代谢速率，确定药物的合适剂量，避免实际诊疗中反复试药调整，延误最佳治疗时机，同时也可规避引发毒性反应的药物，达到安全、有效用药的目的。例如：非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类具有抗炎、镇痛和解热作用的非类固醇药物，常用于治疗慢性疼痛和炎性病症。细胞色素P4502C9酶(CYP2C9)是NSAIDs重要的代谢酶，其基因多态性是导致个体间药物疗效及不良反应差异的重要原因之一。因此，预测CYP2C9基因与NSAIDs代谢有关的单核苷酸多态性(SNPs)可能是实现非甾体抗炎药个体化治疗的重要手段之一。

利用基因检测手段，对不同个体的药物代谢酶相关基因多态性进行检测，临床医生可根据患者的基因型确定给药方案，提高药物对个体的疗效评估，降低药物的毒副反应，同时减轻患者的痛苦和经济负担，且具有一定的社会意义和经济意义。

目前针对基因多态性检测的技术很多，普遍使用的技术包括基于设计引物探针的荧光定量PCR法和一代测序方法等，这些技术具有操作繁琐，相同成本下检测药物及位点有限，以及无法实现多位点的同时检测等缺点，使得目前在临床上对于多态性检测技术应用仍不理想，一直无法满足临床检测需求。随着高通量测序技术的发展，二代测序技术(NGS)越来越多的被应用于基因检测项目，可高效率地同时完成大量目标区域的高深度检测，且在保证检测准确性的同时，还可以一次性对成千上万个样本进行处理。

发明内容

针对上述现有技术，针对现有基因多态性检测技术中存在的灵敏度低、操作复杂、成本高等问题，本发明提供了一种检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物、试剂盒及检测方法。本发明基于二代测序技术，具有灵敏度高、成本低、操作简单、通量高等特点，可以一次性检测22种药物相关的20个多态性位点。

本发明是通过以下技术方案实现的：

检测解热镇痛及呼吸系统类药物个性化基因的引物，包括20对特异性引物，具体如表1所示，如SEQ ID NO.1～40所示。

表1

其中，各引物的序列中包含用于二代测序的通用接头序列，序列如下：5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNN(I7index)ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’；以及5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNNNNNNNN(I5index)GTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA-3’。包含用于数据拆分时的index序列，序列中N表示AGCT任意碱基，I7index及I5index分别为8个碱基长度的DNA序列，用于特异性识别不同样本的数据。