[发明专利]鸭肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用

说明书

本发明具体涉及一种鸭肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用，属于动物检疫技术领域。本发明通过对肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌全基因组序列进行比对分析，筛选出肠炎沙门氏菌lyg D基因特异性片Sdf I和鼠伤寒沙门氏菌特异性基因STM4497作为鉴别靶标，并设计特异性引物与探针。本发明设计合成的引物探针，具有快速、灵敏、特异性强、稳定性好，且不易污染。肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测方法的成功建立有助于增强对养鸭过程中沙门氏菌的检测力度。对于从源头控制疫病，进而制定有效的防控措施。

技术领域

本发明具体涉及一种鸭肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测引物探针组、试剂盒及其应用，属于动物检疫技术领域。

背景技术

鸭沙门氏菌病是肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和鸭沙门氏菌等引起的疾病的总称。各种日龄的鸭都能感染，主要发生于雏鸭，可造成大批死亡。山东省是养鸭大省，随着规模化养鸭场中，集约化不断提高，养殖密度越来越大，导致鸭群沙门氏菌感染持续上升。鸭群一旦暴发该病，可迅速传播蔓延，对养鸭业危害巨大。因此，鸭源沙门氏菌的污染情况应得到高度关注。

而肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌是养鸭场中分离率最高的血清型。不同血清型沙门氏菌的致病性、感染宿主范围和对象不同，实验室以及诊疗机构对沙门氏菌血清型的鉴定对疾病的治疗尤为重要。多重PCR方法除兼具快速与灵敏的优势外还具有通量高的优点，其基本原理是，在同一个反应体系中加入多对扩增引物，同时对多对特异基因进行扩增，它可以同时检测多对致病基因，这种检测方法的优点是可以节省检测时间，减少检测成本。但是目前，多重PCR检测过程中，多个靶点之间扩增条件不兼容，且各对引物的最佳PCR条件也不尽相同，实际操作过程中的扩增效果和实际扩增的片段数目往往不尽如人意，容易出现假阳性以及当样品中致病菌含量较低时出现的假阴性等问题，从而影响最终的检测结果。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种能够同时对鸭肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测引物探针组，本发明建立的多重荧光PCR检测技术，不仅继承了多重PCR的优点，还进一步提高了检测的灵敏度，能够避免因样品中的杂质较多，出现的假阳性以及当样品中致病菌含量较低时出现的假阴性问题，进一步保障了检测结果的准确。

本发明还提供了一种含有上述引物探针组的试剂盒，为快速鉴别肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌提供一种简便方法。本发明的试剂盒具有特异性强、敏感性高等优点。

本发明的另一目的为提供了一种上述试剂盒的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种鸭肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌双重荧光PCR检测引物探针组，所述引物探针序列为：

肠炎沙门氏菌上游引物 SE-F如SEQ ID NO.1所示：

5’ - TTGATGTGGTTGGTTCGTCACT - 3’；

肠炎沙门氏菌下游引物 SE-R如SEQ ID NO.2所示：

5’- CGAATGGTGAGCAGACAACAGG - 3’；

肠炎沙门氏菌探针 SE-P如SEQ ID NO.3所示：

5’ FAM - CAGCGAGCATGTTCTGGAAAGCCT - BHQ1 3’；

鼠伤寒沙门氏菌上游引物 ST-F如SEQ ID NO.4所示：

5’ – AAAGGACCACAAGTTCGC - 3’；

鼠伤寒沙门氏菌下游引物 ST-R如SEQ ID NO.5所示：

5’ – CAAATAACCCACGTTCAGT - 3’；

鼠伤寒沙门氏菌探针 ST-P如SEQ ID NO.6所示：