[发明专利]一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法

说明书

本发明公开了一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤如下：S1、将脂肪间充质干细胞接种到含培养基中；S2、向传代细胞中加入消化酶，消化3‑5min，收集细胞，离心，弃上清，按1:3的传代比例将干细胞接种到新的培养皿或孔板中；S3、将1g油酸溶于DMSO中，制成0.5mol/L的浓储液，再加入到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中，制成油酸条件培养液；S4、取3‑5代的传代细胞，接种至油酸条件培养液中，培养1‑5代；S5、诱导成脂分化：添加成脂诱导剂至已接种预处理传代细胞的培养液中，每隔48h换一次培养液，继续培养1‑5代。本发明采用上述的一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，缩短了细胞群体的增值时间，加快了细胞成脂分化进程，促进了脂肪酸代谢。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其是涉及一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法。

背景技术

脂肪间充质干细胞(adipose-derivedmesenchymalstemcells，ADSCs)是存在于脂肪组织中的一类具有多向分化潜能的成体干细胞，具有相似于骨髓间充质干细胞的生物学特性，具有自我更新、旁分泌、免疫调控等能力。在体外操作中，ADSCs具有来源广泛、侵入性小、获取方便的特点，体外分离容易，且纯度高。还可通过原位注射与静脉注射的方式进行自体或异体移植，进入体内后可自行靶向归巢、参与组织重建，且抗免疫排斥反应，是进行组织器官修复的理想种子细胞，也是医疗美容中目前应用最广的细胞产品。

现有技术中，通常采用一步法自体脂肪干细胞丰胸的方法，通过采集自体脂肪细胞分离培养脂肪干细胞，将培养的脂肪干细胞加入脐带间充质干细胞以及再次采集自体脂肪细胞混合，再加入生长因子与转换因子，混合均匀后过滤弃滤渣，取清亮滤液注入乳房的不同位置，从而达到丰胸效果。

然而，移植后自体脂肪干细胞进入体内后，其成脂分化进程慢、增殖能力低、特异性基因表达水平低、脂肪酸代谢程度低。因此，发明一种提高脂肪间充质干细胞成脂分化能力、促进脂肪酸代谢的脂肪间充质干细胞培养方法对于干细胞培养技术领域十分重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，增强脂肪间充质干细胞的成脂分化能力，提高干细胞增殖速度，促进干细胞的脂肪酸代谢。

为实现上述目的，本发明提供了一种油酸在脂肪间充质干细胞培养方法中的应用。

一种利用油酸培养脂肪间充质干细胞的方法，步骤如下：

S1、取培养至1-3代的脂肪间充质干细胞，接种到培养基中；

S2、向传代细胞中，加入消化酶，消化3-5min，收集细胞，离心，弃上清，按1:3的传代比例将干细胞接种到新的培养皿或孔板中；

S3、将1g油酸溶于DMSO中，制成0.5mol/L的浓储液，再加入到含DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS的培养基中，制成油酸条件培养液；

S4、预处理：取3-5代的传代细胞，接种至油酸条件培养液中，培养1-5代；

S5、诱导成脂分化：诱导成脂分化：添加成脂诱导剂至已接种预处理传代细胞的培养液中，每隔48h换一次培养液，继续培养1-5代。

优选的，步骤S1中，所述培养基所含成分为DMEM/F12、15％FBS、0.1％PS。

优选的，步骤S2中，所述传代细胞为汇合度达到80-90％的细胞；所述消化酶为0.25％的胰酶；所述离心速率为1500rpm，离心时间为5min。

优选的，步骤S3中，所述油酸条件培养液的浓度为0.01-1mmol/L。