[发明专利]一种电生理记录用中老年小鼠脑切片的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种中老年小鼠脑切片用人工脑脊液ACSF，其特征在于，其包括：用于制取中老年小鼠脑切片时的人工脑脊液sACSF；和/或，用于电生理记录时孵育中老年小鼠脑切片的人工脑脊液cACSF；

其中，所述sACSF包含N-甲基-D-葡萄糖胺60～63mM、氯化胆碱29～32mM、氯化钾2.3～2.6mM、碳酸氢钠26～29mM、磷酸二氢钠1.0～1.3mM、HEPES18～21mM、D-葡萄糖23～26mM、硫脲1.8～2.1mM、抗坏血酸钠4.8～5.1mM、丙酮酸钠2.8～3.1mM、硫酸镁9.8～10.1mM、氯化钙0.48～0.51mM、环磷腺苷钠1.8～2.1mM和N-乙酰半胱氨酸10～13mM，PH值为7.3～7.4，渗透压为300～310mOsm/L；

其中，所述cACSF包含氯化钠91～94mM、氯化钾2.3～2.6mM、碳酸氢钠26～29mM、磷酸二氢钠1.0～1.3mM、HEPES18～21mM、D-葡萄糖23～26mM、硫脲1.8～2.1mM、抗坏血酸钠4.8～5.1mM、丙酮酸钠2.8～3.1mM、硫酸镁1.8～2.1mM、氯化钙2.3～2.6mM和环磷腺苷钠1.8～2.1mM，PH值为7.3～7.4，渗透压为300～310mOsm/L。

2.如权利要求1所述的中老年小鼠脑切片用人工脑脊液ACSF，其特征在于，

所述sACSF包含N-甲基-D-葡萄糖胺62mM、氯化胆碱31mM、氯化钾2.5mM、碳酸氢钠28mM、磷酸二氢钠1.2mM、HEPES20mM、D-葡萄糖25mM、硫脲2mM、抗坏血酸钠5mM、丙酮酸钠3mM、硫酸镁10mM、氯化钙0.5mM、环磷腺苷钠2mM和N-乙酰半胱氨酸12mM，PH值为7.3～7.4，渗透压为300～310mOsm/L；

所述cACSF包含氯化钠93mM、氯化钾2.5mM、碳酸氢钠28mM、磷酸二氢钠1.2mM、HEPES20mM、D-葡萄糖25mM、硫脲2mM、抗坏血酸钠5mM、丙酮酸钠3mM、硫酸镁2mM、氯化钙2.5mM和环磷腺苷钠2mM，PH值为7.3～7.4，渗透压为300～310mOsm/L。

3.如权利要求1或2所述的中老年小鼠脑切片用人工脑脊液ACSF的制备方法，其特征在于，

所述sACSF的制备：分别称量N-甲基-D-葡萄糖胺、氯化胆碱、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、HEPES、D-葡萄糖、硫脲、抗坏血酸钠、丙酮酸钠、环磷腺苷钠、N-乙酰半胱氨酸、硫酸镁和氯化钙，加水溶解；其中硫酸镁和氯化钙最后添加，并且一个溶解完全后再溶解另外一个；

所述cACSF的制备：分别称量氯化钠、氯化钾、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、HEPES、D-葡萄糖、硫脲、抗坏血酸钠、丙酮酸钠、环磷腺苷钠、硫酸镁和氯化钙，加水溶解；其中硫酸镁和氯化钙最后添加，并且一个溶解完全后再溶解另外一个；

分别向以上制备得到的所述sACSF、所述cACSF溶液中加入盐酸调节pH至7.3～7.4。

4.一种电生理记录用中老年小鼠脑切片的制备方法，其特征在于，所述制备方法中使用如权利要求1或2所述的中老年小鼠脑切片用人工脑脊液ACSF；所述制备方法包括如下步骤：

1)将脑组织放入冷却至冰水混合物状态的氧饱和的所述切片用人工脑脊液sACSF中进行脑组织冷却和切片；

2)将步骤1)得到脑组织切片迅速转移至31℃氧饱和的孵育用人工脑脊液所述cACSF中复苏1小时。

5.按如权利要求4所述方法制备得到的电生理记录用中老年小鼠脑切片。

6.如权利要求5所述的电生理记录用中老年小鼠脑切片，其特征在于，其具有：在膜片钳记录中具有高阻封接能力，不小于1GΩ；在场电位记录中具有突触传递能力，最大电刺激诱导的兴奋性突触后电流不小于0.4mV；和/或，在场电位记录中具有突触可塑性，长时程突触增强不小于120％。

7.权利要求1或2所述的中老年小鼠脑切片用人工脑脊液ACSF、如权利要求4所述的制备方法、如权利要求5或6所述的电生理记录用中老年小鼠脑切片在电生理记录中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括在电生理指标包括刺激强度-反应曲线和突触可塑性记录中的用途。