[发明专利]无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，其特征在于：

所述基础培养基包括氨基酸、维生素、无机盐和辅助类成分；

所述添加剂包括0.01-0.5mg/L铁离子螯合剂和0.1-2.5μmol/L小分子化合物CHIR99021。

2.根据权利要求1所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述铁离子螯合剂的浓度为0.05-0.5mg/L，所述小分子化合物CHIR99021的浓度为0.2-1.0μmol/L。

3.根据权利要求1或2所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述铁离子螯合剂为柠檬酸铁铵。

4.根据权利要求1或2所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述PK-15细胞培养基中不包含蛋白及蛋白水解物。

5.根据权利要求4所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述蛋白及蛋白水解物包括血清白蛋白、转铁蛋白和植物水解蛋白。

6.根据权利要求1所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述氨基酸包括10-30mg/L甘氨酸、1-10mg/L丙氨酸、100-300mg/L精氨酸盐酸盐、2-20mg/L天冬酰胺、1-15mg/L天门冬氨酸、5-50mg/L半胱氨酸盐酸盐水合物、5-50mg/L L-胱氨酸二盐酸、5-30mg/L L-谷氨酸、100-1000mg/L谷酰胺、10-100mg/L组氨酸盐酸盐水合物、10-500mg/L异亮氨酸、10-1000mg/L亮氨酸、10-1000mg/L赖氨酸盐酸盐、1-100mg/L甲硫氨酸、1-100mg/L苯丙氨酸、5-100mg/L脯氨酸、1-100mg/L丝氨酸、10-500mg/L苏氨酸、1-100mg/L左旋色氨酸、5-100mg/L L-酪氨酸二钠盐二水合物和10-100mg/L缬氨酸。

7.根据权利要求1所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述维生素包括0.001-0.1mg/L生物素、1-100mg/L氯化胆碱、1-50mg/L D-泛酸钙、1-5mg/L叶酸、1-25mg/L烟酰胺、1-25mg/L盐酸吡哆醇、0.05-0.5mg/L核黄素、1-10mg/L盐酸硫胺素、0.1-2.5mg/L维生素B12、1-50mg/L肌醇和1-500mg/L维生素C。

8.根据权利要求1所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述无机盐包括100-200mg/L氯化钙、0.001-0.002mg/L硫酸铜、0.01-0.1mg/L硝酸铁、0.1-0.8mg/L硫酸铁、10-50mg/L氯化镁、20-100mg/L硫酸镁、100-500mg/L氯化钾、4000-7000mg/L氯化钠、50-100mg/L磷酸氢二钠、10-100mg/L磷酸二氢钠单水合物和0.2-0.8mg/L硫酸锌。

9.根据权利要求1所述的PK-15细胞培养基，其特征在于，所述辅助类成分包括1000-5000mg/L葡萄糖、1000-5000mg/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、1-10mg/L次黄嘌呤钠、0.005-0.05mg/L亚硒酸钠、0.01-0.1mg/L亚油酸、1-10mg/L亚麻酸、0.05-0.5mg/L硫辛酸、1-40mg/L酚红、0.01-0.2mg/L腐胺、1-100mg/L丙酮酸钠、0.1-0.55mg/L胸苷、1-20mg/L肉毒碱、1-50mg/L羧酸和0.002-0.025mg/L人表皮生长因子。

10.一种如权利要求1至9中任一项所述的无血清超低蛋白的PK-15细胞培养基的制备方法，包括：

将基础培养基和添加剂溶解于水中，得到混合液；

调节所述混合液的pH值和渗透压，使pH至在7.0～7.4范围内，渗透压在300～340mOsm/kg；

将经调节后所得的混合液进行过滤，得到所述PK-15细胞培养基。