[发明专利]一种Sau DNA聚合酶突变体及其应用

说明书

本发明公开了一种Sau DNA聚合酶突变体及其应用。所述Sau DNA聚合酶突变体在野生型Sau DNA聚合酶基础上突变获得的，其中，编码所述野生型Sau DNA聚合酶的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述Sau DNA聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；突变位点包括F8、I27、I290、L418、V426中的任意一种或两种以上的组合。本发明通过改变Sau DNA聚合酶的F8、I27、I290、L418、V426五个位点的氨基酸改变得到了聚合酶突变体，提高了3’OH的催化特异性活性，降低了非特异性扩增，提高了重组酶扩增的灵敏度。

技术领域

本发明属于分子生物学、蛋白质组学技术领域，具体涉及一种Sau DNA聚合酶突变体及其应用。

背景技术

核酸恒温扩增检测是一种新型的分子检测技术，能够从血液或者人体附属物及环境中分析检测特定基因序列，预测疾病、鉴定病毒种类等，对病毒防控有着重要意义。本发明涉及一种Sau DNA聚合酶，该聚合酶是重组酶扩增反应体系中不可缺少的DNA聚合酶，SauDNA聚合酶的最佳工作温度37℃，可以不依赖于加热装置，轻松满足加热条件，对于特殊环境做基因检测有着特殊意义，Sau DNA聚合酶的性能直接影响着重组酶扩增的灵敏度及特异性，从而影响对结果准确定的判断。

天然的野生型Sau DNA聚合酶有着很强的taling活性(末端加尾活性)，能够非特异性的在引物的3’羟基末端添加脱氧核糖核酸，这样减少Sau DNA聚合酶的特异性，使其不能和模板完全匹配，导致扩增序列失真。非特异性产物的扩增会对造成大概率的假阳性，使扩增不能真实反映出模板的序列，从而影响结果的判断。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种Sau DNA聚合酶突变体及其应用，以克服现有技术的不足。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种Sau DNA聚合酶突变体，所述Sau DNA聚合酶突变体在野生型Sau DNA聚合酶基础上突变获得的，其中，编码所述野生型Sau DNA聚合酶的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，所述Sau DNA聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；突变位点包括F8、I27、I290、L418、V426中的任意一种或两种以上的组合。

本发明实施例还提供了一种低末端加尾活性的聚合酶突变体，所述聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明实施例还提供了一种低末端加尾活性的聚合酶突变体，所述聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、SEQ ID NO:5所示或SEQ ID NO:6所示。

本发明实施例还提供了包含前述聚合酶突变体的试剂、试纸、试剂盒。

本发明实施例还提供了前述聚合酶突变体在重组酶扩增中的用途。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明通过改变Sau DNA聚合酶的F8、I27、I290、L418、V426五个位点的氨基酸改变得到了聚合酶突变体，提高了3’OH的催化特异性活性，降低了非特异性扩增，提高了重组酶扩增的灵敏度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1中Sau DNA聚合酶突变电白电泳结果图；

图2是本发明实施例2中Sau DNA聚合酶突变体taling活性测定图；

图3是本发明实施例3中Sau DNA聚合酶突变体在无模版扩增时RPA扩增荧光曲线图；