[发明专利]一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒，属于生物检测技术领域。该试剂盒中包括蛋白标记物和DNA甲基化生物标记物，该双标记物组合物与消化道肿瘤发生相关。通过两种标记物的结合后输出的检测数据，适用于辅助医生对早期消化道肿瘤作出判断。使用NEBNext Enzymatic Methyl‑seq kit进行胞嘧啶到尿嘧啶的转化，不会造成cfDNA的断裂，可以保存血液中甲基化的最真实的状态；采用两种标记物结合后输出的检测数据，能够显著提高检出率和准确率，做到同时检测并有效地区分肝癌、胃癌和结直肠癌，并鉴于离体血液样本检测的无创性，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒。

背景技术

消化道肿瘤是目前高发肿瘤的类型，根据现有全国肿瘤年报统计，肝癌、胃癌、结直肠癌发病率分别位居高发肿瘤的3、4、5位，死亡率位居癌症死亡率的前列。如此高的发病率与死亡率意味着，大多数的消化道肿瘤都是中晚期才被发现。在临床实践中，对消化道肿瘤的早期诊断依然是个巨大的挑战，肿瘤确诊时仅有20-30％的切除率，术后5年生存率为30-50％。

当前肿瘤早筛的手段有影像学检查、血清学分子标志物检查和病理学检查等几种。影像学检查可以检测出直径≥1cm的腺瘤，但是对于更早期的病变则检测灵敏度较低，而且存在一定辐射，可能诱发癌性病变。病理学检查对肝癌患者的身心会造成创伤，受患者身体及心理素质的影响较大，且短时间内无法进行多次检查。血清学分子标志物是目前可用于检测和监测消化道肿瘤的常规手段，然其临床效用受到低灵敏度的限制。

目前，大多数检查手段都只是针对单一癌症，如甲胎蛋白结合超声检查用于肝癌筛查；胃幽门螺旋杆菌检测用于胃癌筛查以及肠镜检查用于筛查结直肠癌患者。这些方法对于早期消化道癌症的检测灵敏度普遍较低，且需要这些方法同时使用才能够完成肝癌、胃癌以及结直肠癌的筛查，不利于泛消化道肿瘤筛查的推广。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒，该试剂盒中通过利用双标记物组合物结合检测，解决现有技术中对于早期消化道肿瘤检测流程繁杂、单独使用任一标记物造成的检测性能的局限性、结果不准确或是存在较多的假阳/阴性的技术问题。本申请该试剂盒可以通过一次检测同时检测并区分消化道中发病率前三的肿瘤，且操作简单，利于大规模推广。

本发明的第二目的在于提供一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒，该试剂盒使用NEBNext Enzymatic Methyl-seq kit进行胞嘧啶到尿嘧啶的转化，解决了传统重亚硫酸盐转化法易导致cfDNA的断裂，进而引发甲基化状态改变，检测结果不准确的技术问题。

本发明通过以下技术方案实现：

一种用于检测早期消化道肿瘤的试剂盒，所述试剂盒包括双标记物组合物；

所述双标记物组合物包括蛋白标记物和DNA甲基化生物标记物；

所述蛋白标记物包括甲胎蛋白，胃泌素和糖类蛋白抗原24-2中的一种或多种的组合物；

所述DNA甲基化生物标记物包括hg19人类基因组中的chr7:45018849-45018850中的一种或多种的组合物。

DNA甲基化是一种表观调控修饰，在不改变碱基序列的情况下参与调控蛋白质的表达。在肿瘤细胞普遍存在着DNA甲基化状态的改变，而且对于早期肿瘤的发生，甲基化的修饰也起着至关重要的作用。同时相对于其他血液肿瘤标记物来说，血液cfDNA甲基化标志物被证明能够更加灵敏地检出早期肿瘤患者。此外，由于血液甲胎蛋白水平、胃泌素蛋白水平以及糖类蛋白抗原24-2分别在肝癌、胃癌和结直肠癌患者中会特异性地升高或下降，因此血液cfDNA甲基化结合血清蛋白标志物的检测手段，能够提高早期癌症的检出率的同时又可以对消化道肿瘤进行简单有效的溯源，是一种简便快捷且经济可行的早期消化道肿瘤检测方法。