[发明专利]一种间充质干细胞内皮分化诱导剂

说明书

本发明一种间充质干细胞内皮分化诱导剂，由血管内皮生长因子、骨形成蛋白‑4、肿瘤坏死因子α、促红细胞生成素、淫羊藿苷、雷帕霉素、睾酮、二甲双胍、曲美替尼组成，在加入完全培养基后，各成分作用浓度依次为血管内皮生长因子20‑40μg/L、骨形成蛋白‑4 20‑40μg/L、肿瘤坏死因子α5‑10μg/L、促红细胞生成素5‑10μg/L、淫羊藿苷5‑10mg/L、雷帕霉素5‑10μg/L、睾酮20‑40μg/L、二甲双胍20‑40μg/L、曲美替尼20‑40μg/L。本发明的间充质干细胞内皮分化诱导剂，采用细胞因子联合小分子化合物，高效诱导间充质干细胞分化为内皮细胞，诱导分化效率极大提高，诱导后细胞活性强，无伦理问题，安全性高。

技术领域

本发明属于干细胞诱导分化技术领域，具体涉及一种间充质干细胞定向分化诱导剂。

背景技术

内皮细胞属于上皮细胞类型，构成整个循环血管系统的最内层，除作为外周血液与血管管壁的屏障之外，内皮细胞还具备分泌、代谢、合成、免疫调控等重要生理功能。目前国外学者应用内皮细胞治疗缺血性疾病，已取得了一定的效果，但由于内皮细胞获取困难，且为终末分化细胞，不能大量扩增，因此不能满足移植或构建组织工程血管所需的大量细胞，故选择一种临床上易获取、体外培养易扩增的种子细胞已成为血管组织工程研究的热点。

间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的干细胞，在胚胎发育中来源于中胚层，具有分化为多种中胚层细胞系的潜能，包括成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞、肝脏细胞、胰岛细胞、表皮细胞、内皮细胞等。间充质干细胞来源广泛且没有伦理限制，易于分离和体外扩增，在经过多次分裂传代后仍保持多向分化潜能，至今为止的临床试验研究未发现间充质干细胞有严重副作用，是一种非常理想的细胞治疗和再生医学的种子细胞。

目前文献报道的运用间充质干细胞体外诱导内皮干细胞分化的研究报道不多，诱导方法也比较类似，分化获得率也较低。包括在培养基中添加血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白-4等因子及低氧环境、明胶包被培养板诱导分化等方法。 还没有大规模的高效体外诱导获得内皮细胞的方法，限制了细胞治疗临床应用的发展，迫切需要一种新的诱导分化的方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供间充质干细胞内皮分化诱导剂，该诱导剂能够将间充质干细胞定向诱导分化为内皮细胞。目前多数间充质干细胞内皮分化诱导剂存在诱导时间过长，诱导效率低，诱导后获得内皮细胞活性差。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种间充质干细胞内皮分化诱导剂，由血管内皮生长因子、骨形成蛋白-4、肿瘤坏死因子α、促红细胞生成素、淫羊藿苷、雷帕霉素、睾酮、二甲双胍、曲美替尼组成，在加入完全培养基后,各成分作用浓度依次为血管内皮生长因子20-40μg/L、骨形成蛋白-4 20-40μg/L、肿瘤坏死因子α 5-10μg/L、促红细胞生成素5-10μg/L、淫羊藿苷5-10mg/L、雷帕霉素5-10μg/L、睾酮20-40μg/L、二甲双胍20-40μg/L、曲美替尼20-40μg/L。所述的完全培养基为Keratinocyte-SFM、人间充质干细胞专用无血清培养基或者DMEM/F12+10%FBS。

优选的，一种间充质干细胞内皮分化诱导剂，在加入完全培养基后，各成分作用浓度依次为血管内皮生长因子30μg/L、骨形成蛋白-4 30μg/L、肿瘤坏死因子α 8μg/L、促红细胞生成素8μg/L、淫羊藿苷8mg/L、雷帕霉素7μg/L、睾酮30μg/L、二甲双胍30μg/L、曲美替尼30μg/L。所述的完全培养基为Keratinocyte-SFM、人间充质干细胞专用无血清培养基或者DMEM/F12+10%FBS。

本发明的间充质干细胞内皮分化诱导剂，采用细胞因子联合小分子化合物，高效诱导间充质干细胞分化为内皮细胞，诱导分化效率极大提高，诱导后细胞活性强，无伦理问题，安全性高。

附图说明

图1 间充质干细胞诱导后CD31阳性的内皮细胞（×200）；