[发明专利]一种复合佐剂

说明书

本发明公开了一种复合佐剂，所述复合佐剂中包含表面活性剂或环糊精，还包含胆固醇和免疫刺激性皂苷；其中，所述免疫刺激性皂苷为选自QS‑7、QS‑17、QS‑18、QS‑21、QuilA、Vax Sap、SuperSap、GPI‑0100或QP UF 1000中的一种或几种。本发明中的复合佐剂能够替代通常使用的脂质体，与免疫刺激性皂苷相互配合，不仅可以增强抗原的体液免疫反应，而且还可以诱导T细胞免疫反应。同时这种配方制备简单，避开了脂质体相对繁琐的制备工艺，与抗原混合制成冻干制剂，增加了抗原与佐剂的稳定性。本发明中的复合佐剂还能够降低免疫刺激性皂苷的溶血性。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别涉及一种复合佐剂。

背景技术

冷冻干燥是提高疫苗热稳定性的理想技术，冻干型的疫苗性质更稳定，更便于储存，可在常规冷链条件下贮存与运输。但目前很多疫苗所使用的佐剂，例如铝佐剂、MF59和含QS21成分的AS01、免疫刺激复合物(ISCOM)和Matrix-M等佐剂由于添加了脂质体成分导致不能被冻干。由于脂质体在冻干过程中出现的冰晶形成、生长和升华现象均对脂质体产生破坏作用，并且冻干过程中会造成磷脂融合，因此脂质体冻干复溶后会出现聚集、融合、粒径增大等现象。由于上述原因，含脂质体的疫苗通常分别将冻干疫苗抗原和液体脂质体佐剂单独包装，接种前混合使用。这样不仅在工艺上更加繁琐，成本更高，同时也不便于使用。因此，找到一种脂质体佐剂的替代物成为了解决上述问题的有效手段。

发明内容

本发明的一个方面，是针对现有技术中免疫刺激性皂苷类复合佐剂中含有脂质体，从而无法进行冷冻干燥的缺陷，提供了一种新的免疫刺激性皂苷类复合佐剂。

本发明提供的技术方案为：

一种复合佐剂，所述复合佐剂中包含表面活性剂或环糊精，还包含胆固醇和免疫刺激性皂苷；

其中，所述免疫刺激性皂苷为选自QS-7、QS-17、QS-18、QS-21、QuilA、Vax Sap、SuperSap、GPI-0100或QP UF 1000中的一种或几种。

在本发明中，发明人创造性地利用表面活性剂或环糊精以及胆固醇的组合物替代了脂质体，与免疫刺激性皂苷相互配合，不仅可以增强抗原的体液免疫反应，而且还可以诱导T细胞免疫反应，同时这种配方制备简单，避开了脂质体相对繁琐的制备工艺，与抗原混合制成冻干制剂，增加了抗原与佐剂的稳定性。

作为优选，在本发明的一个实施方式中，所述免疫刺激性皂苷为QS-21。

在本发明中，表面活性剂或环糊精与胆固醇形成的包合物能够同时增强胆固醇的溶解度，从而使胆固醇与免疫刺激性皂苷，例如QS-21，相结合后获得降低免疫刺激性皂苷的溶血性的效果。

在本发明中，所述复合佐剂的制备可以利用现有技术中的常规方法进行。但为了更好地实现本发明的效果，在本发明的某些实施方式中，所述制备方法例如：称取3gHP-β-CD，置50ml烧杯中，加生理盐水(N.S)30ml，搅拌溶解后，加入胆固醇10mg，水浴超声至胆固醇完全溶解，即得胆固醇环糊精包合物(CDchol)溶液。加入适量QS21溶解后，加入终浓度为5％的甘露醇，0.22μm微孔滤膜除菌过滤，经冷冻干燥后即得CDchol-QS21佐剂。

为了筛选出更优的复合佐剂组分，在本发明的某些实施方式中，发明人选择了不同类型的表面活性剂进行筛选：阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠、非离子表面活性剂Triton X-100、tween20、tween80和HP-β-环糊精。应用绵羊红细胞溶血试验测定溶血率，评价溶血作用及溶解胆固醇后中和QS21的溶血作用。结果表明，作为优选，所述表面活性剂为吐温80。