[发明专利]一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法

权利要求书

1.一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法，包括以下步骤：

（1）在亚硝酸盐标准溶液中加入Cu₂O-Ce-TCPP纳米酶、2,4-二氯苯酚(2,4-DP)、4-氨基安替比林(4-AP)，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，制得的亚硝酸盐溶液浓度范围在0.32-143.75 μg/g，摇匀，静置5-10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与亚硝酸盐浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；

（2）提取净化检测样品中亚硝酸盐，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu₂O-Ce-TCPP纳米酶、2,4-DP、4-AP，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，摇匀，静置5-10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中亚硝酸盐含量；

所述Cu₂O-Ce-TCPP纳米酶制备如下：

Cu₂O的制备：在2mol/L 10 -15 mL的NaOH溶液中加入0.01 mol/L 100-120 mLCuCl₂，室温搅拌30-40 min，然后加入0.6mol/L 5 -10 mL抗坏血酸，在55℃水浴中搅拌5-6h，用去离子水洗涤2-3次，真空干燥，即得；

② Cu₂O-Ce的制备：取上述制备的Cu₂O颗粒30-35mg，加入50%乙醇10 -15 mL，0.1 mol/L 10-15 mL Ce(NO₃)₃，超声处理20-30 min，然后在紫外灯下照射搅拌1-1.5 h，即得；

③ Cu₂O-Ce-TCPP的制备：将上述制备的Cu₂O-Ce溶液，加入到0.02gTCPP被溶解在DMF与正己烷 (v/v=3:1)混合溶液10mL中，60 ℃搅拌6-8 h，离心，用乙醇和去离子水交替洗涤2-3次，真空干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述的样品测定液制备如下：

香肠或腌肉样品：将香肠或腌肉匀浆处理，从匀浆后的试样中称取 5 g（精确到0.001 g）样品，置于50 mL烧杯中，加12.5 mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，用150~200 mL 70℃左右的热水将烧杯中的试样全部加入500 mL烧杯中，于沸水浴中加热 15 min，加入10%硫酸锌溶液2.5 mL，搅拌10 min，离心，上清液过0.22 μm滤膜，得样品液；

液体饮料样品：取 10.0 mL 的待测样品置于 100 mL 烧杯中，加入5 mL饱和硼砂溶液，用玻璃棒搅拌均匀后引流至500 mL 的烧杯中，用蒸馏水洗3-4次，加入5 mL 的 220g/L乙酸锌溶液，搅拌10 min，离心，上清液过0.22 μm滤膜，得样品液；

腌菜样品：准确称取2.5 g（精确到0.001 g）经匀浆处理的腌菜样品，置于250 mL烧杯中，加入12.5 mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，用150~200 mL 70 ℃左右的热水将烧杯中的试样全部加入500 mL烧杯中，于沸水浴中加热15 min，加入10%乙酸锌溶液2.5 mL，搅拌10min，离心，上清液过0.22 μm滤膜，得样品液；

样品脱色处理：取上述制备的样品液加入少量改性活性炭，涡旋混合1-2 min，离心分离，取出上清液，制得样品测定液。

3.根据权利要求2所述的基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法，其特征在于：所述改性活性炭制备包括：取活性炭，在0.1mol/L HCl 或HNO₃溶液中浸泡2 h后，室温下震荡12-20 h，过滤，蒸馏水冲洗至活性炭表面为中性，进行抽滤，100℃下干燥3-6h，即得改性活性炭，其中改性活性炭与样品液的重量比为0.5-3：10。

4.根据权利要求1所述的基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中亚硝酸盐的方法，其特征在于：100µg/mL Cu₂O-Ce-TCPP纳米酶添加量为50~100µL，1mg/mL 2,4-DP添加量为100-150 µL，1mg/mL 4-AP添加量为100-150 µL，离心条件为离心时间5-10 min，离心速率1000-3000 r/min。