[发明专利]小花清风藤中2种齐墩果烷型三萜类化合物及其提取方法与应用

说明书

本发明公开了小花清风藤中2种齐墩果烷型三萜类化合物及其提取方法与应用，以小花清风藤干燥叶为原材料通过提取、分离、纯化等手段分离得到2种齐墩果烷型三萜类化合物，即3‑氧‑Δ⁹⁽¹¹⁾_,¹²‑齐墩果二烯和3‑氧‑Δ¹¹_,¹³⁽¹⁸⁾‑齐墩果二烯，制备方法简单易行，所得化合物纯度高，经药理研究表明2种齐墩果烷型三萜类化合物均具有显著的保肝活性，具有良好的经济效益和应用前景。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及小花清风藤中2种齐墩果烷型三萜类化合物及其提取方法与应用。

背景技术

小花清风藤，为清风藤科植物小花清风藤Sabia parviflora Wall.ex Roxb.的茎和叶。国内主要分布于贵州西南部、云南东南部至西南部、广西西部及西南部；在贵州西南地区，苗族、布依族用小花清风藤的茎藤治疗风湿关节痛，跌打损伤痛，以及肝炎等疾病。现代研究表明，小花清风藤含有黄酮类、生物碱类、三萜类、皂苷类等成分。目前现有技术中小花清风藤的保肝药理研究多限于粗提物，对其中含有的单体化合物的保肝活性进行活性评价有限。

发明内容

针对上述的不足，本发明的目的在于，提供小花清风藤中2种齐墩果烷型三萜类化合物及其制备方法与应用，通过对小花清风藤干燥叶回流提取、分离、纯化等过程得到2种齐墩果烷型三萜类化合物，并通过药理研究表明2种齐墩果烷型三萜类化合物均具有显著保肝活性。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

小花清风藤中2种齐墩果烷型三萜类化合物，所述两种齐墩果烷型三萜类化合物分别为3-氧-Δ^9(11),12-齐墩果二烯和3-氧-Δ^11,13(18)-齐墩果二烯，所述3-氧-Δ^9(11),12-齐墩果二烯的结构式如式Ⅰ所示，所述3-氧-Δ^11,13(18)-齐墩果二烯的结构式如式Ⅱ所示：

进一步地，具体包括有以下步骤：

1)提取：取小花清风藤干燥叶，粉碎，加入其15倍量体积的二氯甲烷溶液，40℃条件下回流提取3次，每次1小时，过滤，合并提取液，将提取液浓缩，得到浸膏Ⅰ；

2)制样：将浸膏Ⅰ加入其5倍量体积的丙酮溶解，滤去不溶物后，将丙酮液浓缩得浸膏Ⅱ，然后将浸膏Ⅱ加入其8倍量的甲醇加热溶解，形成饱和溶液，将饱和溶液放入7℃的冰箱中放置10h，得到制备液，然后将制备液用布氏漏斗进行抽滤，滤液弃去，将抽滤得到的沉淀在烘箱中设置60℃进行烘干，即得到样品Ⅰ；

3)分离纯化：将样品Ⅰ使用其1.5倍量体积的混合溶剂Ⅰ溶解，再加入等量的柱色谱硅胶，搅拌均匀，然后挥去混合溶剂Ⅰ，得到分离样品Ⅰ，取分离样品Ⅰ20倍量的柱色谱硅胶，湿法装柱，使用起始溶剂Ⅰ等度洗脱，每8个柱色谱保留体积收集1段，共收集3段样品，分别命名为P1、P2、P3；

将P2的样品使用其1.5倍量的混合溶剂Ⅰ溶解，再加入与其等量的柱色谱硅胶，搅拌均匀，然后挥去混合溶剂Ⅰ，得到分离样品Ⅱ，取分离样品Ⅱ20倍量的柱色谱硅胶，湿法装柱，使用起始溶剂Ⅱ等度洗脱，每4个柱色谱保留体积收集1段，共收集6段样品，分别命名为P2-1、P2-2、P2-3、P2-4、P2-5、P2-6；

将P2-2反复重结晶得到结构式如式Ⅰ所示的3-氧-Δ^9(11),12-齐墩果二烯，将P2-4反复重结晶得到结构式如式Ⅱ所示的3-氧-Δ^11,13(18)-齐墩果二烯。

进一步地，所述混合溶剂Ⅰ为二氯甲烷:丙酮＝1:1的混合液，所述起始溶剂Ⅰ为二氯甲烷:丙酮＝10:1的混合液，所述起始溶剂Ⅱ为二氯甲烷:丙酮＝20:1的混合液。