[发明专利]一种趋磁细菌工程菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种趋磁细菌工程菌株，其特征在于，所述趋磁细菌工程菌株中同时含有磁小体合成关键基因和启动子。

2.根据权利要求1所述的趋磁细菌工程菌株，其特征在于，所述磁小体合成关键基因具有下列核苷酸序列之一：

(1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

(2)SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

(3)SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

(4)与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列、或者SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列、或者SEQID NO.3所示的核苷酸序列具有95％以上同源性的，且编码相同生物学功能蛋白质的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的趋磁细菌工程菌株，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求1所述的趋磁细菌工程菌株，其特征在于，所述趋磁细菌工程菌株能够显著提高产生磁小体的能力。

5.权利要求1所述的磁细菌工程菌株的构建方法，其特征在于，其包含以下步骤：

(1)提取磁螺菌的基因组；

(2)以提取的磁螺菌基因组为模板，扩增得到目的基因和启动子片段；

(3)将目的基因和启动子片段进行重叠延伸；

(4)将步骤(3)得到的延伸产物和质粒分别进行酶切后，将得到的酶切产物分别进行酶连，得到重组质粒；

(5)将步骤(4)的重组质粒转化感受态细胞，得到重组菌株；

(6)将重组菌株和野生型磁螺菌进行接合，筛选验证正确的工程菌株，得到磁细菌工程菌株。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中，目的基因具体为核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的mamA基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的mamR基因、或者核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的mamP基因。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述扩增mamA基因的引物的序列为：

mam A-F：5'-CCGGAGATCAATGTCTAGCAAGCCGTCGAATATG-3'；

mam A-R：5'-CCCGGTATCGATAAGCTTTTAGACGGCCGAACGTTCATCG-3'；所述扩增mamR基因的引物的序列为：

mam R-F：5'-GCCGGAGATCAATGACCTTTGTTCAGGGCGCCATGG-3'；

mam R-R：5'-CCCGGTATCGATAAGCTTTCATCGGTTCATGTATTCCAC-3'；所述扩增mamP基因的引物的序列为：

mam P-F：5'-GCCGGAGATCAATGAATAGCAAACTCGTCCTGC-3'；

mam P-R：5'-CCCGGTATCGATAAGCTTTCATCGGTTCATGTATTCCAC-3'。

8.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述启动子为核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示的Pmam DC，其扩增引物序列为：

Pmam DC-F：5'-CCGCTGCAGGAATTCTTTAAGGGGCAGAGAGGGAATC-3'；Pmam DC-A-R：5'-CTAGACATTGATCTCCGGCAAGTGTATGCAC-3'；或者Pmam DC-R-R：5'-CAAAGGTCATTGATCTCCGGCAAGTGTATGC-3'；或者Pmam DC-P-R：5'-GTTTGCTATTCATTGATCTCCGGCAAGTGTATG-3'。

9.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(4)中酶连时，所述延伸产物和质粒的酶切产物的体积比为5:2～4:3。

10.权利要求1-4任一项所述的磁细菌工程菌株在免疫磁性分离、检测技术、或者制备靶向肿瘤治疗药物中应用。