[发明专利]检测遗传性共济失调致病基因的引物组及方法

说明书

本发明公开了一种检测遗传性共济失调致病基因的引物组及方法，所述引物组包括STD‑PCR引物组和RP‑PCR引物组，本发明只需要两种反应体系，两个反应程序，即可实现12种亚型致病基因的一次性检测，提高了检测效率，降低了不同检测程序的时间成本及仪器使用成本，在临床上具有极其重要的作用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，更具体地，本发明涉及一种同时检测遗传性共济失调致病基因的引物组及方法。

背景技术

遗传性共济失调(hereditary ataxia,HA)是一大类具有高度临床和遗传异质性、病死率和病残率较高的遗传性神经系统退行性疾病，约占神经系统遗传性疾病的10％～15％。临床上以小脑共济失调为主要特征，表现为平衡障碍、进行性肢体协调运动障碍、步态不稳、构音障碍、眼球运动障碍等，并可伴有复杂的神经系统损害。

脊髓小脑共济失调(spinal cerebellar ataxias,SCA)是一组常染色体显性遗传性疾病，具有多种亚型。SCA能引起小脑、脊髓小脑束和脑干神经元变性。Friedreich's共济失调(FRDA)是一种罕见的常染色体隐性遗传病，以进行性肌肉自主运动丧失(即共济失调)和心脏扩大为特征，通常在儿童期可以诊断，男女都可以患病。SCA3是汉族人群最常见的SCA亚型，其次依次为SCA1、SCA2和SCA6。中国汉族人常染色体显性遗传性脊髓小脑共济失调3型(SCA3)约占常染色体显性遗传性共济失调半数以上，而SCA1、SCA2、SCA6和SCA7型少见，其他类型如SCA8、SCA12、SCA17和SCA35型，以及齿状核红核苍白球路易体萎缩(DRPLA)等亚型则极为罕见。

SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA8、SCA10、SCA12、SCA17、SCA36、DRPLA、FRDA均由相应致病基因的多核苷酸重复扩增引起。其中，SCA1、SCA2、SCA3、SCA6、SCA7、SCA12、SCA17、DRPLA基因被发现是由CAG重复数目增加引起，SCA8则由SCA8基因3’非翻译区CTG重复数目异常增加引起，SCA10由ATXN10基因内含子9的ATTCT重复数目增加引起，SCA36由NOP56基因的第一内含子的GGCCTG重复引起。FRDA是FXN基因突变导致的常染色体隐性遗传病，其第1内含子的GAA重复序列长度决定基因是否正常、前突变或为突变基因。

片段分析(Fragment analysis，FA)是一种分子生物学技术，这里的片段特指以DNA或者cDNA为模板，由PCR过程所产生的，数目不等的核苷酸构成的大小不等的DNA片段，然后进行毛细管电泳，利用荧光检测器对不同片段大小的产物进行识别和区分，通过荧光标记片段与分子量内标的比较获得片段的相对大小。目前常规的共济失调动态突变检测，是针对共济失调的单个致病基因分别设计引物进行PCR扩增，对PCR目标扩增进行片段分析，检测出重复数量。不同的基因因其体系和PCR程序有较大差异，检测效率低，不适合此类疾病多基因筛查。

因此，有必要提供一种能同时检测共济失调多种致病基因的方法。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种检测遗传性共济失调致病基因的引物组、试剂盒及方法。

实现上述发明目的的技术方案包括如下。

本发明的第一方面，提供了一种检测遗传性共济失调致病基因的引物组，包括：STD-PCR引物组和RP-PCR引物组；

其中，所述STD-PCR引物组包括：

检测SCA1亚型的引物对，所述引物对包括序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物；

检测SCA2亚型的引物对，所述引物对包括序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物；