[发明专利]积雪草组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取积雪草带腋芽茎段，消毒后，得到积雪草无菌外植体；

2)利用诱导培养基培养积雪草无菌外植体，待外植体萌发后获得积雪草初代苗，诱导培养基中含1.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，0.1-1.0mg/L的激动素；

3)利用增殖培养基培养积雪草初代苗，得到初代苗丛生芽，增殖培养基中含0.05-0.35mg/L的吲哚乙酸、0-0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1-1.0mg/L的激动素；

4)利用壮苗培养基培养初代苗丛生芽，得到积雪草健壮苗，壮苗培养基中含0.1-0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸、0.2-0.8g/L的活性炭；

5)利用生根培养基培养积雪草健壮苗，至根长2-4cm，得到积雪草带根苗，生根培养基中含0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸、0-0.5mg/L的萘乙酸、0.5-1.0g/L的活性炭；

6)将积雪草带根苗经炼苗后移栽至基质中培养。

2.如权利要求1所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，诱导培养基、增殖培养基和壮苗培养基均采用MS培养基，生根培养基采用1/2MS培养基，诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均含有5.0g/L的琼脂和30g/L蔗糖，pH值均为5.8。

3.如权利要求2所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤2)中，培养温度为24-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10-12小时/天，培养15-30天；步骤3)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；步骤4)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养10-21天；步骤5)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天。

4.如权利要求3所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，诱导培养基中含2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，0.5mg/L的激动素；增殖培养基中含0.2mg/L的吲哚乙酸、0.25mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的激动素；壮苗培养基中含0.3mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/L的吲哚乙酸、0.5g/L的活性炭；生根培养基中含0.3mg/L的吲哚乙酸、0.25mg/L的萘乙酸、0.75g/L的活性炭。

5.如权利要求4所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤2)中，诱导培养时间为15天，诱导培养中还含有0.1mg/L的灵发素与2mg/L的纳米氧化锌，光照培养时为白光与红蓝光交替环境下光照处理，先白光光照9小时/天，再红蓝光光照3小时/天，最后暗培养12小时/天，依次循环，其中红光与蓝光比为2:1。

6.如权利要求4或5所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤4)中，壮苗培养时间为10天，壮苗培养基中还含有0.2g/L的水解酪蛋白与20μmol/L的茉莉酸甲酯，光照培养时为白光与红蓝光交替环境下光照处理，先白光光照8小时/天，再红蓝光光照4小时/天，最后暗培养12小时/天，依次循环，其中红光与蓝光比为2:3。

7.如权利要求1所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤1)中消毒过程具体为：将积雪草带腋芽茎段依次用质量浓度为1％洗洁精水溶液浸泡5-10min，自来水冲洗15-30min，无菌水润洗一次，用体积浓度为75％的酒精浸泡30-50s，再用添加了2-3滴吐温-80的150ml质量浓度为0.1％升汞消毒6-8min，无菌水冲洗3-5次，摊开在消毒滤纸上以除去表面水分。

8.如权利要求1所述的积雪草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，移栽的基质由育苗土、羊粪与蛭石按质量比为5:1:1组成。