[发明专利]动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒,包括沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品、所述试剂盒针对沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物，对检测品进行预处理和吸附柱纯化后进行检测，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂、扩增试剂测序引物和阳性对照。本发明具有简单快速、样品用量少、灵敏度高、不需洗涤等优点。

技术领域

本发明属于生物检测检测方法技术领域，尤其是涉及一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒。

背景技术

沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林是具有相似的化学结构和功能的β-受体激动剂。沙丁胺醇、溴布特罗、特布他林可以用于作为舒张剂治疗哮喘等疾病同时还是可以作为生长促进剂和育肥剂减少脂肪含量，增加肌肉蛋白质的合成。然而，他们对人产生严重的影响，如心悸、头痛等。所以如果用含有沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的饲料或其他添加剂饲养动物，则沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林可能残留在动物体内，人们食用这类肉制品后会对人产生严重的影响。需要对动物肌肉组织进行检测。

现有的检测沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的方法有有酶联免疫法，超高效液相色谱法(UPLC)，气相色谱串联质谱法(GC－MS)，色谱法设备昂贵且操作繁琐，不适用于现场快速检测。酶联免疫法存在假阳性，免疫过程时间长，酶标物易失活等问题。为了确保食品安全，有必要建立一种快速有效的方法来检测和筛选沙丁胺醇、溴布特罗及特布他林，因此，为此，我们提出一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明包括沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品、所述试剂盒针对沙丁胺醇标准品、溴布特罗标准品、特布他林标准品的基因多态性设计特异性扩增引物和测序引物，对检测品进行预处理和吸附柱纯化后进行检测，所述试剂盒包括如下组分：样本处理液、磁珠、扩增试剂、扩增试剂测序引物和阳性对照。

进一步地，加入25mL S0mmolL HC，振饬20mmin；在8O00 rlmin,l5 c条件下离心10min；移取18mL上清液(3g样品)于新离心管中。加人2mL0.5mmol/L NaOH,混勾10min；加人10mL 500mnol/L.KH-PO。缓冲液(p-3)，简单混合并置于4℃下至少1.5h；在8000rmin,15℃条件下离心10min；移取10mL上清液(l g样品)。回酒至室温(20-25c)，用RIDACg柱纯化。

进一步地，所述吸附柱纯化步骤:用3mL甲醇(100％)洗涤柱子:用2mL.50mmol/LKHPO。缓冲液6pH-3)洗涤柱子；祥品洛液进柱；用2mL 50mmolLKH-PO。缓冲液(pH＝3)洗涤柱子；用正压去除残留的液体并用空气吹2min干燥柱子；用l mL甲醇(ID0％洗脱样品,遣速为15滴/mira,加正压收集所有洗脱液；在50～60℃下怎气吹干；用l mL燕馏水溶解干燥的残留物,取20L进行分祈。

进一步地，所述样本处理液包括0.1％-0.6％十二烷基硫酸锂、0.1-0.5％曲拉通X-100、2-50mg/mL氢氧化钠、5-15％海藻糖、3～7mmol/L BSA、20-80mM Tris-HCl、100mMNaCl，PH＝8.5-9.5。

与现有技术相比，本发明提供了一种动物源性肌肉组织中沙丁胺醇、溴布特罗和特布他林的AlphaLISA检测试剂盒，具备以下有益效果：

本发明具有简单快速、样品用量少、灵敏度高、不需洗涤等优点。

附图说明