[发明专利]一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法

说明书

本发明公开了一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法，涉及植物种苗繁育技术领域。该包埋玻璃化超低温疗法，包括将红芽芋茎尖放入含0.5mg/LABA的MS培养基上预培养2d，转入包埋基质，再移入含有0.1mol/L氯化钙和0.6mol/L蔗糖的MS液体培养基中固化40min，冰冻脱水后保存，在35℃的水浴中化冻；本发明还提供了一种红芽芋脱毒苗的制备方法。本发明所提供的包埋玻璃化超低温疗法可脱除芋花叶病毒，也可促进试管芋膨大的方法，对充分发挥和利用我国地方红芽芋资源优势和丰富特色蔬菜种类有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物种苗繁育技术领域，特别是涉及一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法。

背景技术

Sakai等于1990年建立了玻璃化冻存的简单高效的技术体系，在材料冰冻之前用高浓度冰冻保护剂处理再投入液氮使脱水样品玻璃化而没有冰的产生。但由于PVS保护剂浓度很高，对材料毒害性极大，因而需严格控制脱水过程及冰冻保护剂的渗透性，此外该法较难在同一时间内处理大量材料。

包埋脱水法最早出现在法国学者Fabre和Dereuddre(1990)保存马铃薯茎尖的研究中，它参照了人工种子的技术结合低温保存的需要，将包埋与脱水相结合，应用于超低温保存中。但是包埋脱水法与玻璃化法相比组织恢复生长慢、脱水所需时间长，而且在一些植物中成苗率低。

江西铅山红芽芋是国家地理标志农产品，药食兼优，营养全面，补脾益肠，长期无性繁殖易导致其病毒积累、种性退化、产量和品质下降，给红芽芋生产造成较大损失。本研究以江西铅山红芽芋为试材，通过包埋玻璃化超低温疗法技术，获得一种可脱除芋花叶病毒，也可促进试管芋膨大的方法，对充分发挥和利用我国地方红芽芋资源优势和丰富特色蔬菜种类有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种红芽芋包埋玻璃化超低温疗法脱毒促进试管芋膨大的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本发明提供的包埋玻璃化超低温疗法可以有效促进试管芋的膨大和有效脱毒。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

技术方案一：一种红芽芋的包埋玻璃化超低温疗法，包括将红芽芋茎尖放入含0.5mg/LABA的MS培养基上预培养2d。

进一步地，所述预培养的条件为：光强为1800lx，温度为26℃。

进一步地，还包括以下步骤：先将预培养后的红芽芋茎尖转入包埋基质，再移入含有0.1mol/L氯化钙和0.6mol/L蔗糖的MS液体培养基中固化40min，冰冻脱水后保存，最后在35℃水浴中化冻。

进一步地，所述包埋基质为含有2％海藻酸钠和0.4mol/L蔗糖的MS培养基。

进一步地，所述冰冻脱水包括先采用冰冻保护剂进行冰冻，再在25℃下脱水45min，最后更换新的冰冻保护剂。

进一步地，所述冰冻保护剂的组分包括PVS2和0.6mol/L蔗糖。

进一步地，所述保存是在液氮中冷冻1d。

技术方案二：一种红芽芋脱毒苗的制备方法，在结束所述的化冻操作后，将化冻得到的茎尖暗培养5d，光培养15d，发育成芽后转入含有0.3mg/LNAA的1/2MS生根培养基中培养。

进一步地，所述光培养的条件为：光照时间为14h/d，光强为1500-2000lx，培养温度为25±2℃。

进一步地，所述的生根培养基的培养条件为：光照时间为14h/d，光强为1500-2000lx，培养温度为26℃。

本发明公开了以下技术效果：