[发明专利]一步法生产N-甲基吡咯烷酮的菌株在审
| 申请号： | 202211542820.4 | 申请日： | 2022-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN116024149A | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 朱凌峰;彭莺祺;林恒佳;杨洋;郭卉;罗小舟 | 申请（专利权）人： | 森瑞斯生物科技（深圳）有限公司;中国科学院深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/77;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12P17/10;C12R1/15 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 518067 广东省深圳市南山区招商街道沿山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一步法 生产 甲基 吡咯烷酮 菌株 | ||
1.一株谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，在谷氨酸棒杆菌FF10的基础上，进行了如下改进：
(1)敲除丙酮酸脱氢酶，并增强乌头酸水合酶的表达；
(2)敲除磷酸乙酰转移酶，并增强6-磷酸果糖激酶的表达；
(3)敲除转录调节因子，并过表达谷氨酸脱羧酶；
(4)敲除转录调节因子，并过表达辅酶A转移酶；
(5)敲除琥珀酸半醛脱氢酶3，并过表达S-腺苷高半胱氨酸水解酶。
2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述谷氨酸脱羧酶为谷氨酸脱羧酶GAD MUT128，是具有D38N/I89V/D92N//E93Q/S153T/D202N/P268T/E294R/D301N/F355Y/D432N/H435Q/L451*所示突变的谷氨酸脱羧酶。
3.根据权利要求1或2所述的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌工程菌还表达Coffea canephora来源的N-甲基转移酶。
4.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，所述N-甲基转移酶具有Genbank登录号ABC74575.1所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的谷氨酸棒杆菌工程菌，其特征在于，用质粒pCES表达所述N-甲基转移酶。
6.权利要求5所述的谷氨酸棒杆菌工程菌在N-甲基吡咯烷酮中的应用。
7.一种发酵生产N-甲基吡咯烷酮的方法，其特征在于，将权利要求5所述的谷氨酸棒杆菌工程菌以可利用的单糖、多糖或其混合物为碳源，在pH 7.0±0.2发酵生产N-甲基吡咯烷酮。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述碳源包括葡萄糖、果糖、蔗糖、糖蜜中的一种或多种。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述发酵是在28～30℃，150～250rpm发酵至少48h。
10.权利要求1～4任一所述的谷氨酸棒杆菌工程菌在生产N-甲基吡咯烷酮中的应用。
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