[发明专利]一种人血清白蛋白的检测方法及其应用

说明书

本发明提供了一种人血清白蛋白的检测方法及其应用，所述检测方法包括以下步骤：(1)将待测样品用滤膜过滤，得到供试品溶液；(2)将供试品溶液进行液相检测，根据检测结果结合标准曲线计算待测样品中人血清白蛋白的含量；步骤(2)所述液相检测的流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合液；所述有机溶剂包括异丙醇、乙腈或甲醇中任意一种或至少两种的组合。本发明提供的检测方法精密度高、准确性高，能够有效对细胞培养液中的人血清白蛋白进行准确地定量。

技术领域

本发明属于生物材料检测领域，具体涉及一种人血清白蛋白的检测方法及其应用，尤其涉及一种准确度高的人血清白蛋白的检测方法及其应用。

背景技术

体外细胞培养是需要借助各类细胞培养液模拟体内微环境。其中，人血清白蛋白(下文简称“HSA”)作为细胞生长发育的重要营养补充组分，在细胞培养液中必不可少。不仅如此，HSA还可以有效维持细胞的表面张力，使其在培养过程中不轻易黏附于培养器皿的内表面，便于后续操作处理。此外，有研究指出HSA有中和小分子毒素和维持渗透压稳定的作用，因此添加了HSA的细胞培养液可有效促进其本身的安全性和有效性。

市面上的细胞培养液作为商品化试剂，按相应法规的要求在其出厂前需要对该细胞培养液的主要组分包括人血清白蛋白进行含量测定，以保证其实际使用功能。行业内多采用免疫电泳法(中国药典2020版通则3404)进行人血清白蛋白鉴别，紫外-可见分光光度法(中国药典通则0731)对人血白蛋白的定量分析。但当供试品的人血白蛋白含量低于10mg/mL时，凝胶电泳扩散弧非常淡，容易出现辨别误差。而紫外-可见分光光度法测试含量时，由于细胞培养液成分复杂，又会导致测试结果误差较大。

CN103163301A提供了一种基于时间分辨荧光免疫分析技术的人血清白蛋白(HSA)定量检测试剂盒。该试剂盒包括：包被有抗HSA抗体的96孔微孔反应板，校准品，铕标记抗HSA抗体，分析缓冲液，洗涤液和增强液。通过双抗体夹心的免疫反应，形成包被抗HSA抗体-HSA分子-铕标记抗HSA单克隆抗体复合物，加入增强液并通过时间分辨仪器测值。该发明除拥有TRFIA技术优点外，还可满足生物制品生产中高浓度(微克级)HSA定量检测的要求，避免在使用时稀释待检样品，缩短工作时间大大提高工作效率。但其整体测试过程复杂繁琐，不利于大规模检测。

CN106841128B公开了一类检测人血清白蛋白的高特异性荧光探针的应用。该特异性探针底物是1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮类化合物酯类衍生物，其可用于检测不同生物样品中HSA的存在与否及其活力的定量测定。酶活具体测定流程如下：选择1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮酯类衍生物水解反应为探针反应，选择适宜底物浓度在线性反应区间内通过定量检测单位时间内其水解代谢产物1,3-二氯-7-羟基-9,9-二甲基-2(9H)-吖啶酮的生成量来测定各生物样品中HSA的实际活性。该探针可用于不同来源生物样本中HSA活性的定量评估。

由于目前的常规检测方法中存在各种因素导致误差较大。因此，如何提供一种操作简单、检测结果准确的细胞培养液中的人血清白蛋白的检测方法，成为了亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种人血清白蛋白的检测方法及其应用，尤其提供一种准确度高的人血清白蛋白的检测方法及其应用。本发明提供的检测方法精密度高、准确性高，能够有效对细胞培养液中的人血清白蛋白进行准确地定量。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供了一种人血清白蛋白的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

(1)将待测样品用滤膜过滤，得到供试品溶液；

(2)将供试品溶液进行液相检测，根据检测结果结合标准曲线计算待测样品中人血清白蛋白的含量。

步骤(2)所述液相检测的流动相为缓冲溶液和有机溶剂的混合液。