[发明专利]一种蓝莓无糖组培的方法

说明书

本发明公开了一种蓝莓无糖组培的方法。本发明通过测定蓝莓苗在无糖组培的条件下的光强度、COsubgt;2/subgt;浓度以及红蓝光比与光合速率的关系，通过响应面分析寻找最佳光合作用条件，同时确定了无糖组培中最佳固/液比，以此为依据设定无糖组培条件；同时利用正渗透膜建立培养液缓冲池，来解决培养液浓度和量的问题。蓝莓组培苗在无糖组培下，适配适合的光强和CO2浓度，进行高效率光合作用。通过建立缓冲培养液体系，维持了最佳的培养基质和培养液的比例。这些条件改善了蓝莓组培苗的生根和生长。

技术领域

本发明涉及一种蓝莓无糖组培的方法。

背景技术

蓝莓无糖组培与传统组培相比较，改变了碳源的供给，可降低污染率，且有促进生根等优势，可以快速、低成本地繁育良种。但由于其自身特点如植物需要较强的光合作用来维持其生长和生根，所以就需要针对不同植物来调整合适的光照强度和CO₂ 浓度，以此最大程度满足高效率的植物自养。另外，由于其操作的特殊性，开放式的接种，以及气体的流通，都容易造成营养液蒸发，导致液面下降，如果后续补液容易造成二次污染。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种蓝莓无糖组培的方法。本发明通过测定蓝莓苗在无糖组培的条件下的光强度、CO₂浓度以及红蓝光比与光合速率的关系，通过响应面分析寻找最佳光合作用条件，同时确定了无糖组培中最佳固/液比，以此为依据设定无糖组培条件；同时利用正渗透膜建立两个培养液缓冲池，来解决培养液浓度和量的问题。

一种蓝莓无糖组培的方法，步骤如下：

1）CO₂含量固定的情况下测定蓝莓无糖组培苗的光合作用与光响应曲线，通过求导方式得到光饱和点为1000-1200μmol／(m²s)；

2）在光饱和点下，测定蓝莓无糖组培苗的CO₂含量的响应曲线，通过求导方式得到CO₂的饱和点1000-1200μmol/mol；

3）参考光饱和点和CO₂饱和点，并考虑实际操中所能达到的光强度和光照成本，设定光强度范围为100-300μmol／(m2s)、CO₂浓度范围为100-1200μmol/mol，红光波峰660和蓝光波峰470的比例范围为1~6，在Design-Expert v13的软件下进行响应面分析，得出最佳的方案：光强度为300μmol／(m2s)、CO₂浓度为925μmol/mol、红光/蓝光=3；在此条件下，理论光合速率为6.12 μmol／(m²s)；

4）准备无糖组培营养液，在WPM中去除硝酸钙，添加IBA至 1.0mg/L；按照v:v=1:5000添加中和碳酸钙溶液；盐酸调整pH至5.2，灭菌；然后再添加2ml/L植培净得到无糖组培营养液；

5）研究无糖组培的不同固/液比对蓝莓苗的影响，通过观察根部性状发现最佳方案为按体积比，蛭石：无糖组培营养液=1.8：1.25；最有利于蓝莓组培苗的生根；

6）采用培养容器进行蓝莓无糖组培；培养容器为长方体，利用醋酸纤维素材料的正渗透膜把培养容器分为左右两侧和中部，其中两侧装载有步骤4）得到的无糖组培营养液作为储备液并密封；中部装载有步骤4）得到的无糖组培营养液和培养基质。

步骤3）中，在红光波峰660和蓝光波峰470下，红蓝光强度设置为3：1。

步骤4）中，WPM中去除硝酸钙，添加IBA至 1.0mg/L；按照v:v=1:5000添加中和碳酸钙溶液；盐酸调整pH至5.2，灭菌；然后再添加2ml/L植培净得到无糖组培营养液。

步骤5）中，所述的培养基质为蛭石，按体积比组培基质：无糖组培营养液为1.8：1.25。

步骤6）中，无糖组培盒两侧装有储备液，储备液与无糖组培营养液成分相同，其与中部无糖组培营养液的液面持平。