[发明专利]敲低NKG2A基因的CAR-免疫细胞及其用途

权利要求书

1.一种CAR-免疫细胞，其特征在于，所述CAR-免疫细胞的NKG2A基因被沉默；

其中，所述CAR-免疫细胞的免疫细胞包括NK细胞、T细胞、NKT细胞和γδT细胞中的至少之一。

2.根据权利要求1所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述CAR-免疫细胞的免疫细胞为NK细胞；

任选地，所述NKG2A基因被沉默是通过敲除所述CAR-免疫细胞的NKG2A基因实现的。

3.根据权利要求2所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述敲除是通过CRISPR/Cas9系统实现的；

任选地，所述CRISPR/Cas9系统的sgRNA具有如SEQ ID NO：8～10所示的核苷酸序列中的至少之一；

任选地，所述敲除是通过如下方式进行的：

将携带有所述sgRNA和编码Cas9分子的核酸的表达载体导入待改造的CAR-免疫细胞进行培养处理；

任选地，所述培养处理的时间为24～72h；

任选地，所述表达载体为真核细胞表达载体。

4.根据权利要求1～3任一项所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述CAR-免疫细胞的CAR包括：

胞外区，所述胞外区包括单链抗体和铰链区，所述单链抗体的C端与所述铰链区的N端相连，所述单链抗体特异性识别肿瘤抗原；

跨膜区，所述跨膜区的N端与所述胞外区的铰链区的C端相连；

胞内区，所述胞内区的N端与所述跨膜区的C端相连；

任选地，所述抗原包括选自MSLN、HER2、EGFR、GPC3、MUC1、CEA、CLDN 18.2、EpCAM、GD2、PSCA、CD133、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、BCMA中的至少之一；

优选地，所述抗原为MSLN。

5.根据权利要求4所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述单链抗体具有如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列；

任选地，所述铰链区选自CD8分子的铰链区；

任选地，所述铰链区具有如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求4所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述跨膜区选自CD8分子跨膜段；

任选地，所述跨膜区具有如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列。

7.根据权利要求4所述的CAR-免疫细胞，其特征在于，所述胞内区包括共刺激结构域和胞内信号传导结构域；

任选地，所述共刺激结构域选自41BB分子胞内段；

任选地，所述共刺激结构域具有如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；

任选地，所述胞内信号传导结构域选自CD3ζ分子胞内段；

任选地，所述胞内信号传导结构域具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列。

8.一种药物组合物，其特征在于，包括：

权利要求1～7任一项所述的CAR-免疫细胞；以及

任选地药学上可接受的载体或辅料。

9.权利要求1～7任一项所述的CAR-免疫细胞或权利要求8所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于消除或减轻肿瘤的免疫逃脱机制。

10.权利要求1～7任一项所述的CAR-免疫细胞或权利要求8所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤或癌症；

优选地，所述肿瘤为实体瘤或血液瘤。